细胞存活率测定：评估中间体对细胞增殖和代谢活性的影响，是判断毒性的基础指标。
细胞形态学观察：通过显微镜直接观察细胞形态、贴壁状态及结构完整性的变化。
膜完整性检测：通过检测乳酸脱氢酶（LDH）释放等，评估细胞膜是否受损。
细胞凋亡检测：利用Annexin V/PI双染等方法，定量分析中间体诱导的早期和晚期凋亡细胞比例。
细胞周期分析：检测中间体是否干扰细胞DNA合成与分裂，导致细胞周期阻滞。
线粒体膜电位检测：评估中间体对线粒体功能的影响，线粒体损伤是细胞毒性重要机制之一。
活性氧（ROS）水平测定：检测细胞内氧化应激水平，判断毒性是否与自由基过量产生相关。
克隆形成能力测定：评价中间体对细胞长期增殖和自我更新能力的抑制作用。
炎症因子释放检测：检测细胞培养上清中IL-6、TNF-α等因子水平，评估潜在的致炎风险。
基因突变或DNA损伤初筛：通过彗星实验等方法，初步评估中间体的遗传毒性潜力。
原料药合成中间体：覆盖西他列汀合成路径中所有关键化学中间体，特别是结构复杂的后期中间体。
工艺杂质与降解产物：对合成过程中可能产生的已知与未知杂质进行毒性筛查。
不同浓度梯度样品：设置从低到高多个浓度梯度，以确定无观察效应浓度和半数抑制浓度。
不同溶剂溶解的样品：考察样品在DMSO、培养基等不同溶剂中的表现，排除溶剂干扰。
多批次生产样品：对不同生产批次的中问体进行检测，确保工艺稳定性和产品质量一致性。
阳性与阴性对照品：设立已知毒性物质作为阳性对照，以及完全培养基作为阴性对照。
短期暴露样品：模拟生产或使用中可能出现的短时间（如24小时内）接触场景。
长期暴露样品：评估中间体在多次或持续暴露下（如72小时以上）的累积毒性效应。
与辅料混合的样品：初步考察中间体在与常见药用辅料共存时的生物相容性变化。
纯化前后对比样品：对比纯化工艺前后中间体的毒性差异，验证纯化步骤的有效性。
MTT/CCK-8法：基于线粒体脱氢酶活性，通过比色法快速、定量地测定细胞存活与增殖情况。
台盼蓝染色排除法：经典的死细胞鉴别方法，通过染料排斥原理计数活细胞比例。
乳酸脱氢酶释放法：定量检测胞质LDH释放到培养基中的量，直接反映细胞膜损伤程度。
流式细胞术 Annexin V/PI双染法：高灵敏度区分活细胞、早期凋亡、晚期凋亡和坏死细胞。
流式细胞术PI单染法：通过碘化丙啶染色DNA，分析细胞周期各时相的分布。
JC-1荧光探针法：通过荧光颜色变化（红绿比）灵敏地检测线粒体膜电位的变化。
DCFH-DA荧光探针法：利用荧光探针被ROS氧化后发光的特性，检测细胞内总ROS水平。
克隆形成实验：通过低密度接种长期培养，观察并计数细胞集落形成能力，反映长期毒性。
酶联免疫吸附测定法：用于定量检测细胞培养上清中特定炎症因子的释放浓度。
单细胞凝胶电泳（彗星实验）：在电场作用下，观察受损DNA从核中拖出形成的“彗星尾”，评估DNA损伤。
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