
细胞活力测定:通过检测药物作用后类器官的代谢活性或ATP水平,定量评估药物对肿瘤细胞的杀伤或抑制效果。
类器官形态学分析:利用显微镜观察药物处理后类器官的大小、结构完整性和腔体形成等形态变化,直观判断药物敏感性。
剂量-反应曲线绘制:测试药物在不同浓度梯度下对类器官的抑制效果,计算半数抑制浓度(IC50),量化药物效力。
组合药物协同效应评估:测试两种或多种药物联合使用时对类器官的抑制效果,分析药物间是协同、相加还是拮抗作用。
凋亡检测:通过检测Caspase活性或Annexin V标记等方法,评估药物诱导肿瘤类器官细胞发生程序性死亡的程度。
增殖标志物检测:利用免疫荧光等技术检测Ki-67等增殖标志物的表达变化,评估药物对肿瘤细胞增殖能力的抑制。
干细胞活性评估:检测药物处理后类器官中肿瘤干细胞标志物的表达或自我更新能力,评估药物对肿瘤复发潜能的抑制。
药物作用机制探索:通过下游分子标志物检测,初步探索候选药物可能的作用通路,如DNA损伤反应、特定信号通路抑制等。
长期药物反应监测:对类器官进行持续数周的药物处理与培养,观察其恢复能力,评估药物的长期效应和耐药性产生。
临床结局关联分析:将类器官的药敏测试结果与患者后续的实际临床治疗反应进行比对分析,验证其预测准确性。
结直肠癌类器官:源自结直肠癌组织,用于测试化疗药物(如5-FU、奥沙利铂)、靶向药(如西妥昔单抗)及新型药物的敏感性。
乳腺癌类器官:涵盖不同分子亚型,用于测试激素疗法、CDK4/6抑制剂、PARP抑制剂及化疗方案的有效性。
肺癌类器官:包括非小细胞肺癌和小细胞肺癌,用于评估EGFR-TKI、ALK抑制剂、免疫检查点抑制剂等药物的疗效。
胃癌类器官:模拟胃癌的异质性,用于测试传统化疗、抗HER2疗法及免疫治疗药物的反应。
胰腺癌类器官:源自这种难治性肿瘤,用于筛选吉西他滨、白蛋白紫杉醇等化疗药及靶向组合方案。
肝癌类器官:保留原发肿瘤特性,用于测试索拉非尼、仑伐替尼等靶向药物及局部治疗药物的敏感性。
前列腺癌类器官:用于评估雄激素剥夺疗法、新型抗雄激素药物及化疗在去势抵抗性阶段的疗效。
卵巢癌类器官:用于测试铂类药物、PARP抑制剂及抗血管生成药物的敏感性,指导复发患者的用药选择。
胶质母细胞瘤类器官:模拟脑肿瘤的复杂微环境,用于评估替莫唑胺等化疗药及新兴靶向疗法的效果。
罕见肿瘤类器官:针对肉瘤、神经内分泌肿瘤等罕见类型,建立模型以探索个性化治疗方案。
患者样本采集与处理:通过手术切除或活检获取新鲜肿瘤组织,在无菌条件下进行机械破碎和酶消化,制备成单细胞或小细胞团悬液。
类器官培养与扩增:将肿瘤细胞与基质胶混合,在含有特定生长因子的培养基中进行三维培养,形成并稳定扩增能代表原肿瘤的类器官。
类器官传代与库建立:对成熟类器官进行消化传代,扩大培养规模,并建立活体类器官库或冷冻保存,以备多次药筛使用。
药物准备与浓度梯度设置:根据药物临床血药浓度或前期研究,设置涵盖多个数量级的浓度梯度,通常包括6-8个浓度点。
药物处理与共培养:将大小均一的类器官接种于基质胶中,加入含不同浓度药物的培养基,在培养箱中共同培养数日至数周。
终点检测与信号读取:在预定时间点,采用CellTiter-Glo等发光法、Calcein-AM/PI等荧光染色法或成像分析,读取细胞活力信号。
数据分析与IC50计算:将检测信号归一化处理,以药物浓度为横坐标,细胞活力为纵坐标,通过非线性拟合计算IC50值。
高通量筛选平台应用:利用自动化液体处理工作站和微孔板读板器,在96孔或384孔板中实现大规模、标准化的药物组合筛选。
类器官活细胞成像分析:使用共聚焦显微镜或高内涵成像系统对活体类器官进行长时间动态成像,监测其形态与荧光的实时变化。
分子验证与生物信息学分析:药敏测试后,回收类器官进行RNA测序、蛋白质组学等分析,将药敏表型与分子特征进行关联。
生物安全柜:提供无菌操作环境,用于肿瘤组织的原始处理、类器官的接种与传代,防止样本污染。
二氧化碳培养箱:维持恒定的温度(37℃)、湿度和CO2浓度(通常5%),为类器官的长期三维培养提供稳定环境。
倒置相差显微镜:用于日常观察类器官的生长状态、形态结构以及药物处理后的初步变化。
共聚焦显微镜:具备Z轴层扫功能,用于对类器官进行高分辨率三维成像,观察内部细胞结构、空间分布及荧光标记。
高内涵成像分析系统:自动化显微镜与图像分析软件的结合,可对多孔板中的大量类器官进行快速自动成像和定量分析。
微孔板读板器:包括多功能酶标仪,能够读取发光、荧光和吸光度信号,用于细胞活力等终点法的快速定量检测。
自动化液体处理工作站:实现药物梯度稀释、类器官培养基更换、试剂添加等步骤的自动化,提高通量和重复性。
流式细胞仪:用于将类器官消化成单细胞后,进行细胞周期、凋亡、表面标志物等分析,从细胞群体层面评估药效。
聚合酶链式反应仪:用于对类器官样本进行基因表达分析(qRT-PCR),验证特定靶点或通路相关基因的表达变化。
超低温冰箱:提供-80℃或液氮的低温环境,用于长期保存肿瘤组织样本、建立的类器官株以及重要试剂。
沟通检测需求:为精准把握客户需求,我们会仔细审核申请内容,与客户深入交流,精准识别样品类型、明确测试要求,全面收集相关信息,确保无遗漏。
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样品前处理:收到样品后,开展样品预处理、制样及标准溶液制备等前处理工作。凭借先进仪器设备和专业技术人员,科学严谨对待每个细节,保证前处理规范准确。
试验测试:此为检测核心环节。运用规范实验测试方法精确检测每个样品,实验设计与操作均遵循科学标准,保障测试结果准确且可重复。
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