
分子量测定:精确测定完整蛋白或酶解后肽段的分子量,是肽图谱鉴定的基础。
肽段序列覆盖率:评估通过质谱检测到的肽段序列占目标蛋白全序列的百分比。
二硫键定位:确定蛋白质分子中二硫键的连接位置,分析其高级结构。
翻译后修饰鉴定:检测并定位磷酸化、糖基化、乙酰化等蛋白质翻译后修饰位点。
肽图指纹图谱:通过特定酶解产生的肽段质量数列表,形成用于蛋白质鉴定的特征“指纹”。
氨基酸序列验证:通过串联质谱(MS/MS)解析肽段的碎片离子,验证其氨基酸序列。
氧化、脱酰胺分析:定量检测蛋白质在生产和储存过程中发生的蛋氨酸氧化、天冬酰胺脱酰胺等降解产物。
N-端/C-端序列确认:确认蛋白质或多肽的末端序列,验证其完整性和正确性。
二硫键错配分析:检测非天然的二硫键连接方式,评估蛋白质的正确折叠状态。
杂质肽段鉴定:识别并鉴定样品中存在的非目标肽段,如工艺相关杂质或降解片段。
单克隆抗体:包括抗体完整性、互补决定区(CDR)肽段、糖型分析等。
重组治疗性蛋白:如胰岛素、生长激素、细胞因子等产品的肽图谱分析。
疫苗抗原:对疫苗中的关键蛋白组分进行表征和一致性评价。
多肽类药物:合成或表达的多肽药物的序列确认和杂质分析。
生物类似药:与原研药进行肽图谱比对,证明结构相似性的关键研究。
酶制剂:工业用或药用酶的肽图谱鉴定与质量控制。
血浆蛋白制品:如白蛋白、免疫球蛋白等复杂蛋白产品的分析。
细胞培养上清:用于重组蛋白表达过程中的产物鉴定和监测。
药物偶联物:如抗体偶联药物(ADC)中抗体部分的肽图谱分析。
宿主细胞蛋白残留:通过肽图谱技术鉴定和定量生产工艺中残留的宿主蛋白。
胰蛋白酶酶解:最常用的方法,在精氨酸和赖氨酸位点切割,产生适合质谱分析的肽段。
Lys-C酶解:专一性在赖氨酸C端切割,常与胰蛋白酶联用提高序列覆盖率。
Glu-C酶解:在谷氨酸或天冬氨酸位点切割,用于产生不同的肽段碎片。
化学裂解法:如使用溴化氰在甲硫氨酸位点进行特异性切割。
还原烷基化处理:使用DTT或TCEP还原二硫键,并用碘乙酰胺等烷基化试剂封闭巯基。
高效液相色谱分离:使用反相色谱柱对酶解肽段进行分离,常与质谱在线联用。
液相色谱-质谱联用:将液相色谱的分离能力与质谱的高灵敏度鉴定能力相结合的核心方法。
数据依赖性采集:质谱自动选择强度最高的离子进行碎裂,获得MS/MS谱图。
数据非依赖性采集:对特定质量范围内的所有离子进行无偏见的碎裂,适合复杂样品分析。
数据库搜索比对:将实验获得的质谱数据与理论蛋白质序列数据库进行比对,完成鉴定。
高分辨率质谱仪:如Q-TOF、Orbitrap系列,提供精确分子量测定和高灵敏度检测。
三重四极杆质谱仪:用于目标肽段的定量分析,如修饰位点的定量。
纳升液相色谱系统:提供超高的分离效率和灵敏度,适合微量样品分析。
高效液相色谱系统:用于常规肽段分离,与质谱仪在线连接。
酶解工作站:自动化样品前处理设备,实现酶解、还原烷基化等步骤的标准化。
毛细管电泳系统:作为替代或补充的分离技术,用于肽段分离和纯度检查。
紫外检测器:通常与液相色谱联用,在线监测肽段在214nm等波长下的吸收。
肽谱数据分析软件:如ProteinPilot、PEAKS、Mascot等,用于质谱数据解析和谱图搜索。
样品浓缩仪:用于真空离心干燥或低温浓缩肽段样品,提高上样浓度。
pH计与天平:用于精确配制酶解缓冲液、流动相等试剂,确保实验条件准确。
沟通检测需求:为精准把握客户需求,我们会仔细审核申请内容,与客户深入交流,精准识别样品类型、明确测试要求,全面收集相关信息,确保无遗漏。
签订协议:根据沟通确定的检测需求及商定的服务细节,为客户定制包含委托书及保密协议的个性化协议。后续检测严格依协议执行。
样品前处理:收到样品后,开展样品预处理、制样及标准溶液制备等前处理工作。凭借先进仪器设备和专业技术人员,科学严谨对待每个细节,保证前处理规范准确。
试验测试:此为检测核心环节。运用规范实验测试方法精确检测每个样品,实验设计与操作均遵循科学标准,保障测试结果准确且可重复。
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