肝微粒体温孵实验：将候选化合物与肝微粒体（含CYP450酶等）共孵育，测定其随时间的消耗速率，是评估I相代谢稳定性的核心方法。
肝细胞温孵实验：使用新鲜或冻存的原代肝细胞进行孵育，能同时反映I相和II相代谢途径，更接近体内真实的代谢环境。
S9组分温孵实验：使用肝组织匀浆后的上清液（含微粒体和胞质液）进行孵育，用于同时评估I相和部分II相代谢反应。
血浆稳定性测试：考察化合物在血浆中的化学和酶解稳定性，主要评估其是否易被血浆酯酶等水解。
半衰期（t1/2）测定：通过化合物浓度-时间曲线计算其浓度减少一半所需的时间，是量化代谢稳定性的关键参数。
固有清除率（CLint）计算：基于体外代谢数据，通过数学模型计算得出的理论清除率，可用于预测体内肝清除率。
代谢产物鉴定：利用高分辨质谱等技术，分析并鉴定温孵体系中产生的代谢产物结构，明确主要代谢途径。
CYP450酶表型研究：使用特异性化学抑制剂或重组单酶，确定负责化合物代谢的主要CYP450酶亚型。
跨物种比较研究：比较化合物在不同物种（人、大鼠、犬等）肝微粒体或肝细胞中的代谢差异，为临床前物种选择提供依据。
代谢表型比例分析：定量分析不同代谢途径（如不同CYP酶、UGT酶）对总清除的贡献比例。
小分子化学药物：新化学实体（NCEs）是代谢稳定性研究最主要的对象，涵盖各种治疗领域。
前药：评估前药在靶向部位能否被有效代谢转化为活性母药，以及其在循环中的稳定性。
生物制剂代谢物：针对一些肽类或寡核苷酸类药物，评估其在生物基质中的降解稳定性。
天然产物活性成分：对从中草药或天然来源中提取的活性先导化合物进行代谢特性评估。
候选化合物系列：在药物化学优化阶段，对同一系列的结构类似物进行高通量筛选和排序。
药物相互作用评估物：研究作为酶底物、抑制剂或诱导剂的化合物自身的代谢特征。
手性药物对映体：分别评估左旋体和右旋体可能存在的立体选择性代谢差异。
处方中的辅料：某些情况下需评估辅料对API代谢稳定性的潜在影响。
环境污染物与毒素：在毒理学研究中，评估外源性物质在生物体内的代谢转化与蓄积潜力。
放射性标记化合物：使用同位素标记的化合物进行质量平衡和详细代谢途径研究。
液相色谱-质谱联用法（LC-MS/MS）：目前最主流的定量分析方法，具有高灵敏度、高特异性和高通量特点，用于测定底物消耗和代谢物生成。
高通量自动化温孵法：采用96孔板或384孔板格式，结合自动化液体处理工作站，实现大批量样品的快速并行处理。
底物消耗法：通过测定孵育体系中母药化合物随时间的剩余量，计算其半衰期和固有清除率。
代谢产物生成法：通过监测特定代谢产物（如氧化产物、葡萄糖醛酸结合物）的生成速率来评估特定代谢途径的活性。
荧光法与发光法：使用特定的荧光或发光底物进行CYP450酶活性筛选或抑制试验，适用于早期高通量筛选。
放射性示踪法：使用放射性同位素（如14C、3H）标记的化合物，通过放射性检测来追踪代谢物的分布与生成。
蛋白质沉淀-离心法：常用的样本前处理方法，通过加入有机溶剂沉淀蛋白，离心后取上清液进行LC-MS分析。
固相萃取法：另一种样本前处理技术，用于从复杂生物基质中选择性富集目标化合物，提高检测灵敏度。
数据分析与房室建模法：应用专业软件（如Phoenix WinNonlin）对浓度-时间数据进行拟合，计算药代动力学参数。
高分辨质谱数据依赖采集法：利用Q-TOF等高分辨质谱进行非靶向扫描，用于未知代谢产物的发现与结构推测。
高效液相色谱仪（HPLC/UPLC）：用于分离复杂生物样品中的待测物及其代谢物，是LC-MS系统的前端分离核心。
三重四极杆质谱仪（LC-MS/MS）：定量分析的黄金标准仪器，具有极高的选择性和灵敏度，用于准确定量。
高分辨质谱仪（如Q-TOF, Orbitrap）：用于精确质量数测定和代谢产物鉴定，可推断代谢物元素组成和结构。
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