
N-糖基化位点占有率:定量分析特定天冬酰胺(Asn)位点被糖链修饰的分子占总蛋白分子的比例。
O-糖基化位点鉴定与定量:鉴定丝氨酸(Ser)或苏氨酸(Thr)上的O-连接糖基化,并对其修饰水平进行相对或绝对定量。
糖型谱分析:在特定糖基化位点上,对不同糖链结构(糖型)的丰度进行定量分析。
位点特异性糖基化异质性:评估同一蛋白质上不同糖基化位点的修饰程度差异及糖型分布差异。
糖肽定量:对带有糖链修饰的特异性肽段进行丰度定量,反映该位点的总体糖基化水平。
去糖基化肽段定量:对糖基化位点去除糖链后的肽段进行定量,用于计算位点占有率。
糖基化动力学研究:在不同时间点或处理条件下,监测特定糖基化位点修饰水平的变化。
差异糖基化分析:比较不同样本(如疾病vs健康)之间特定糖基化位点丰度的统计学差异。
绝对定量分析:使用同位素标记的标准肽段或糖肽,测定样品中特定糖基化位点的绝对摩尔浓度。
翻译后修饰串扰分析:研究糖基化与其他修饰(如磷酸化)在同一蛋白或位点上的相互影响关系。
复杂生物样品:包括血清、血浆、细胞裂解液、组织匀浆液等复杂基质中的糖蛋白。
重组治疗性蛋白:如单克隆抗体、融合蛋白、酶替代疗法药物等生物制药的关键质量属性分析。
膜蛋白与分泌蛋白:这两类蛋白是糖基化修饰的主要载体,尤其适用于其分析。
N-连接糖基化:针对保守序列Asn-X-Ser/Thr(X≠Pro)位点的糖基化修饰。
O-连接糖基化:主要针对Ser/Thr位点的糖基化,无严格保守序列,鉴定更具挑战性。
高甘露糖型与复杂型N-糖链:可区分并定量不同分支结构的N-连接糖链。
唾液酸化水平:定量分析糖链末端唾液酸残基的添加程度,与蛋白功能、半衰期密切相关。
岩藻糖基化水平:特别是核心岩藻糖,对抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)有重要影响。
半乳糖基化水平:定量糖链上半乳糖的添加情况,与炎症反应等相关。
微量样本:通过高灵敏度方法,可对微量(微克级甚至纳克级)蛋白样本进行位点特异性分析。
液相色谱-串联质谱法:当前主流的分析方法,通过LC分离糖肽,MS/MS进行鉴定与定量。
基于质谱的标记定量技术:如TMT、iTRAQ、SILAC等,用于多组间相对定量比较。
平行反应监测/多反应监测:基于三重四极杆或Orbitrap的靶向质谱方法,实现高灵敏度、高重复性的绝对定量。
释放N-糖链后分析:使用PNGase F等酶切下总N-糖链,进行衍生化后通过LC-MS或CE-MS分析。
亲水相互作用色谱法:利用HILIC色谱柱高效分离亲水性强的糖肽,提高质谱检测灵敏度。
电子转移/高能碰撞解离碎裂:使用EThcD或HCD等质谱碎裂技术,在获得肽段序列信息的同时保留完整的糖链碎片信息。
酶促18O标记法:在PNGase F去糖基化过程中引入18O同位素标记,用于精确计算位点占有率。
凝集素富集法:使用特定凝集素亲和层析富集带有特定糖型(如唾液酸、岩藻糖)的糖肽。
化学氧化与肼化学富集法:通过高碘酸钠氧化顺式二醇结构,再与酰肼树脂共价结合,实现糖肽/糖蛋白的广泛富集。
生物信息学数据分析流程:利用Byonic、pGlyco、GPQuest等专业软件进行糖肽鉴定、定量和统计学分析。
高分辨率质谱仪:如Orbitrap系列(Exploris, Eclipse)、Q-TOF系列(timsTOF, TripleTOF),提供高质量精度和分辨率。
三重四极杆质谱仪:如Agilent 6495C、Sciex 7500,用于高灵敏度的靶向绝对定量分析(PRM/MRM)。
纳升液相色谱系统:提供超高压、低流速的色谱分离,极大提高质谱进样效率和灵敏度。
高效液相色谱系统:用于样品预处理、糖肽富集后的分离或释放糖链的分析。
毛细管电泳系统:用于释放后糖链的高效分离和荧光检测,特别适合电荷异构体(如唾液酸)分析。
凝集素芯片或微阵列系统:用于快速筛选样本中特定糖型结合谱,提供半定量信息。
酶标仪与荧光检测器:用于基于凝集素或抗体结合的微孔板法定量实验的吸光度或荧光信号读取。
超声波细胞破碎仪:用于高效裂解细胞或组织,提取总蛋白。
高速冷冻离心机:用于样品制备过程中的蛋白沉淀、除盐和相分离等步骤。
自动化液体处理工作站:实现样品前处理(如还原烷基化、酶解、除盐)的自动化,提高通量和重复性。
沟通检测需求:为精准把握客户需求,我们会仔细审核申请内容,与客户深入交流,精准识别样品类型、明确测试要求,全面收集相关信息,确保无遗漏。
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样品前处理:收到样品后,开展样品预处理、制样及标准溶液制备等前处理工作。凭借先进仪器设备和专业技术人员,科学严谨对待每个细节,保证前处理规范准确。
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