样本总蛋白提取与定量：采用裂解液破碎细胞或组织，释放总蛋白成分。通过比色法或荧光法测定蛋白浓度，确保上样量一致，为后续电泳分析提供基础。
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳：根据目标蛋白分子量选择合适浓度的分离胶。在电场作用下使蛋白质按分子量大小分离，形成不同迁移率的条带。
蛋白质转膜至PVDF膜：利用湿转或半干转法将凝胶中的蛋白质转移至固相载体。该过程需优化转膜时间与电流参数以保证转移效率。
膜封闭与非特异性结合阻断：使用脱脂奶粉或牛血清白蛋白溶液浸泡转印膜。封闭液可覆盖膜上未结合蛋白的位点，减少抗体非特异性吸附。
一抗孵育与特异性结合：选用抗核糖核苷酸还原酶特异性抗体与目标蛋白结合。严格控制抗体稀释比例、孵育温度与时间以保障结合特异性。
二抗孵育与信号放大：应用耦联辣根过氧化物酶的种属特异性二抗进行反应。二抗与一抗结合后可显著增强检测信号的灵敏度。
化学发光底物显影：添加鲁米诺类化学发光底物于膜表面。辣根过氧化物酶催化底物发光，通过成像系统捕获光信号。
图像采集与条带分析：使用化学发光成像系统记录显影结果。软件分析目标条带与内参条带的灰度值，计算相对表达量。
方法特异性验证：通过阴性对照和敲低模型验证抗体结合特异性。观察预期分子量位置是否出现单一JianCe条带。
重复性与精密度评估：对同一样本进行多次独立实验检测。计算条带灰度值的变异系数以评估方法稳定性。
线性范围与检测限确定：梯度稀释蛋白样本绘制标准曲线。确定信号响应与蛋白含量呈线性关系的浓度区间。
哺乳动物细胞系裂解液：涵盖HEK293、HeLa等常用贴壁和悬浮培养细胞。用于研究不同生理状态下酶蛋白表达水平变化。
动物组织匀浆样品：包括肝脏、脾脏等高增殖活性组织的提取物。分析器官发育或病理模型中酶的表达差异。
原代培养细胞提取物：从新鲜组织中分离培养的细胞制备蛋白样品。避免细胞系长期传代可能引起的遗传漂变影响。
沟通检测需求：为精准把握客户需求，我们会仔细审核申请内容，与客户深入交流，精准识别样品类型、明确测试要求，全面收集相关信息，确保无遗漏。
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