碳青霉烯酶表型分析测试

发布时间:2026-07-24 08:31:02

检测项目

改良碳青霉烯灭活试验(mCIM):通过将待测菌株与美罗培南纸片共孵育,检测碳青霉烯酶对美罗培南的水解能力,是CLSI推荐的确证CRE的初筛方法。

EDTA改良碳青霉烯灭活试验(eCIM):在mCIM基础上加入EDTA螯合剂,通过对比含EDTA与不含EDTA条件下的水解活性差异,特异性鉴别金属-β-内酰胺酶(MBL)。

Carba NP试验:基于pH指示剂的比色法,直接检测细菌裂解液中碳青霉烯酶水解亚胺培南导致的pH变化,可在2小时内快速区分产碳青霉烯酶菌株。

改良Carba NP试验:针对OXA-48型等弱水解活性酶进行优化的Carba NP方法,通过调整缓冲液和底物浓度提高对D类碳青霉烯酶的检测灵敏度。

硼酸协同抑制试验:利用3-氨基苯硼酸作为丝氨酸碳青霉烯酶(如KPC)的可逆性抑制剂,观察美罗培南或头孢他啶纸片抑菌圈在添加硼酸后的扩大现象。

EDTA协同抑制试验:利用EDTA螯合金属-β-内酰胺酶活性所需的锌离子,通过比较含EDTA与不含EDTA的碳青霉烯纸片抑菌圈直径差异来鉴定MBL产生株。

AmpC与ESBL联合鉴别试验:使用氯唑西林作为AmpC抑制剂和克拉维酸作为ESBL抑制剂,结合头孢吡肟底物进行协同测试,排除非碳青霉烯酶的干扰因素。

免疫层析快速分型检测:采用胶体金标记的单克隆抗体直接捕获菌落中的KPC、NDM、IMP、VIM、OXA-48等特异性抗原表位,实现15分钟内的单菌落酶型鉴定。

双纸片协同扩散法(DDST):将含有不同抑制剂的纸片与美罗培南纸片按特定距离放置于MH琼脂平板上,根据抑菌圈变形模式推断产酶类型。

替莫西林敏感性筛查:利用OXA-48型碳青霉烯酶对替莫西林水解能力弱而保持敏感的特性,作为初步区分OXA-48与其他碳青霉烯酶的辅助指标。

检测范围

A类丝氨酸碳青霉烯酶(KPC型):主要流行于肺炎克雷伯菌中,可被硼酸类化合物抑制,是导致高水平美罗培南耐药的最常见酶型之一。

A类丝氨酸碳青霉烯酶(SME/NMC-A型):染色体介导的罕见酶型,主要见于黏质沙雷菌和某些肠杆菌属细菌,通常表现为对亚胺培南的高水平耐药。

A类丝氨酸碳青霉烯酶(GES型):由GES基因突变衍生而来,兼具ESBL和弱碳青霉烯水解活性,常见于铜绿假单胞菌和肠杆菌目细菌中。

B类金属-β-内酰胺酶(NDM型):全球广泛传播的MBL优势型别,可水解几乎所有β-内酰胺类药物(氨曲南除外),活性依赖锌离子且被EDTA完全抑制。

B类金属-β-内酰胺酶(IMP型):最早在日本发现的获得性MBL家族成员,在铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌JianCe出率较高,具有显著的地域流行特征。

B类金属-β-内酰胺酶(VIM型):主要在地中海沿岸国家和欧洲地区流行的MBL家族成员,常见于铜绿假单胞菌整合子结构中携带传播。

C类头孢菌素酶合并膜孔蛋白缺失:染色体AmpC高产结合外膜蛋白OmpK35/36缺失导致的非产碳青霉烯酶的“假性”CRE表型,需通过表型分析加以排除。

D类丝氨酸碳青霉烯酶(OXA-48家族):包括OXA-48、OXA-181、OXA-232等变异体,水解活性较弱但传播力极强,常表现为低水平美罗培南耐药且不被硼酸或EDTA抑制。

D类丝氨酸碳青霉烯酶(OXA-23家族):鲍曼不动杆菌中最主要的获得性D类碳青霉烯酶家族成员,常与ISAba1插入序列关联导致高水平表达和耐药。

A/B/D多酶共携带复合表型:同一临床分离株同时携带两种或以上不同类别碳青霉烯酶的复杂情况(如KPC+NDM),表现为多重抑制剂协同效应和不典型表型特征。

检测方法

Triton X-100裂解液制备法:使用含0.1% Triton X-100的Tris-HCl缓冲液重悬过夜培养的纯菌落制备粗酶提取物,确保细胞壁充分破碎释放周质空间中的β-内酰胺酶蛋白组分。

检测服务流程

沟通检测需求:为精准把握客户需求,我们会仔细审核申请内容,与客户深入交流,精准识别样品类型、明确测试要求,全面收集相关信息,确保无遗漏。

签订协议:根据沟通确定的检测需求及商定的服务细节,为客户定制包含委托书及保密协议的个性化协议。后续检测严格依协议执行。

样品前处理:收到样品后,开展样品预处理、制样及标准溶液制备等前处理工作。凭借先进仪器设备和专业技术人员,科学严谨对待每个细节,保证前处理规范准确。

试验测试:此为检测核心环节。运用规范实验测试方法精确检测每个样品,实验设计与操作均遵循科学标准,保障测试结果准确且可重复。

出具报告:测试结束立即生成详尽检测报告,经严格审核确保结果可靠准确,审核通过后交付客户。

我们秉持严谨踏实的态度,提供高品质、专业化检测服务。服务全程可追溯,严格遵守保密协议,保障客户满意度与信任度。

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