
CYP450酶抑制试验:评估候选药物对细胞色素P450同工酶活性的抑制作用,是预测代谢性相互作用的核心项目。
CYP450酶诱导试验:检测候选药物对CYP450酶表达水平的上调作用,通常使用人肝细胞进行评价。
时间依赖性抑制试验:鉴别药物是否通过代谢中间体与酶共价结合,导致不可逆或准不可逆的酶失活。
血浆蛋白结合置换试验:研究药物与血浆蛋白(如白蛋白、α1-酸性糖蛋白)的结合竞争,评估游离药物浓度变化风险。
肝微粒体温孵试验:利用肝微粒体作为酶源,研究药物在I相代谢中的相互作用。
肝细胞温孵试验:使用原代肝细胞或肝细胞系,在更完整的细胞环境中评估代谢相互作用。
重组CYP酶试验:利用表达单一特定人CYP同工酶的重组系统,精确鉴定参与代谢的酶亚型及抑制特异性。
转运体抑制试验:评估药物对P-糖蛋白、BCRP、OATP等药物转运体功能的抑制作用。
代谢表型鉴定试验:确定药物在体内的主要代谢酶,为后续相互作用研究提供靶点。
反应性代谢物筛查:检测药物是否形成可与蛋白质共价结合的反应性中间体,这可能影响酶功能。
CYP1A2:主要参与咖啡因、茶碱等药物的代谢,是常见的相互作用靶点。
CYP2C9:负责华法林、苯妥英钠等窄治疗窗药物的代谢,其抑制可能导致严重不良反应。
CYP2C19:参与氯吡格雷、奥美拉唑等药物的代谢,其表型多态性与相互作用密切相关。
CYP2D6:代谢多种精神类药物,且存在显著的基因多态性,是相互作用研究重点。
CYP3A4/5:人体最重要的代谢酶,约50%的临床药物由其代谢,是相互作用风险评估的重中之重。
UGT酶系:尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶,负责药物的II相结合反应,如SN-38(伊立替康活性代谢物)的葡萄糖醛酸化。
外排转运体P-gp:位于肠上皮、血脑屏障等部位,影响药物吸收与分布,其抑制或诱导是相互作用的常见机制。
摄取转运体OATP1B1/1B3:主要位于肝细胞基底膜,介导他汀类药物等的肝脏摄取,其抑制可导致血药浓度升高和肌病风险。
BCRP转运体:乳腺癌耐药蛋白,影响甲氨蝶呤、拓扑替康等药物的肠道吸收和胆汁排泄。
血浆蛋白结合位点:重点关注对华法林、地高辛等高蛋白结合率药物的置换潜力。
Cocktail探针底物法:将多种特定CYP酶的探针底物混合温孵,通过一次实验高效评估对多个CYP酶的抑制潜力。
LC-MS/MS定量分析:液相色谱-串联质谱法,高灵敏度、高特异性地定量分析探针底物的代谢产物生成量或原型药减少量。
荧光底物检测法:使用能产生荧光产物的探针底物,适用于高通量筛选初评,但需注意荧光干扰问题。
发光法检测:基于生物发光原理的检测方法,操作简便快速,常用于CYP3A4等酶的初步抑制筛选。
Western Blotting:免疫印迹法,用于检测肝细胞中CYP450酶蛋白水平的诱导表达变化。
实时荧光定量PCR:测定CYP450酶或转运体mRNA的表达水平,从转录水平评价药物的诱导作用。
Caco-2细胞模型转运实验:利用人结肠腺癌细胞系模型,评价药物对肠上皮细胞转运体功能的影响。
膜囊泡转运实验强>: 使用过表达特定转运体的膜囊泡,直接测定药物对转运体摄取或外排功能的抑制活性。
平衡透析法/超滤法强>: 用于测定药物的血浆蛋白结合率及评估其他药物对其产生的置换作用。
<强>谷胱甘肽捕获试验强>: 通过监测谷胱甘肽加合物的形成,来筛查反应性代谢物的生成。
<强>液相色谱-串联质谱联用仪(LC-MS/MS)强>: 体外DDI研究的核心设备,用于代谢产物的高灵敏度、高选择性定量分析。
<强>高效液相色谱仪(HPLC)强>: 配备紫外或荧光检测器,用于分离和定量分析温孵体系中的底物及产物。
<强>多功能酶标仪强>: 具备吸光度、荧光和化学发光检测功能,适用于基于微孔板的高通量筛选实验读数。
<强>细胞培养箱强>: 提供恒定的温度、湿度和CO2环境,用于肝细胞、Caco-2细胞等体外模型的培养和诱导实验。
<强>超速离心机强>: 用于制备肝微粒体、S9组分以及细胞分浆后的亚细胞组分分离。
<强>实时荧光定量PCR仪强>: 精确测定药物诱导后特定基因mRNA表达量的变化。
<强>平衡透析装置或快速平衡透析仪强>: 专门用于研究药物血浆蛋白结合率及置换作用的设备。
<强>生物安全柜/超净工作台强>: 为无菌操作细胞培养及相关实验提供洁净环境。
<强>-80℃超低温冰箱强>: 用于长期保存肝微粒体、重组酶、探针底物等关键生物试剂和样品。
<强>恒温水浴摇床/振荡培养箱强>: 为体外温孵实验提供恒温及均匀混匀的条件。
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