
细胞存活率测定:评估经链脲霉素处理后,活细胞占总细胞数的百分比,是毒性评价的核心指标。
半数抑制浓度计算:确定链脲霉素抑制50%细胞活力所需的浓度,用于量化毒性强度。
细胞形态学观察:在显微镜下观察细胞形态变化,如皱缩、脱落、碎裂等,直观判断毒性损伤。
乳酸脱氢酶释放率:检测培养基中LDH的活性,反映细胞膜完整性受损和细胞坏死程度。
活性氧水平检测:测定细胞内活性氧物种的含量,评估链脲霉素诱导的氧化应激水平。
线粒体膜电位变化:检测线粒体膜电位去极化情况,指示早期细胞凋亡和线粒体功能损伤。
细胞凋亡率分析:通过流式细胞术等方法定量分析发生早期和晚期凋亡的细胞比例。
细胞周期分布检测:分析链脲霉素对细胞周期各时相分布的影响,判断是否引起周期阻滞。
克隆形成能力测定:评估单个细胞增殖形成集落的能力,反映药物对细胞长期增殖潜能的抑制。
细胞内ATP含量测定:量化细胞内三磷酸腺苷的水平,直接反映细胞的能量代谢状态和活力。
胰岛β细胞系:如INS-1、MIN6、RIN-m5F等,用于研究链脲霉素诱导的糖尿病模型机制。
其他肿瘤细胞系:包括肝癌、乳腺癌、神经母细胞瘤等,探索其广谱抗肿瘤潜力。
原代培养细胞:如分离的小鼠或大鼠原代胰岛细胞,更接近体内生理状态。
正常组织来源细胞:如肝细胞、肾小管上皮细胞等,评估药物的选择性毒性。
三维细胞球模型:模拟体内微环境的立体培养体系,用于更真实的毒性反应测试。
不同物种来源细胞:涵盖人、大鼠、小鼠等多种物种的细胞,进行种属差异性比较。
基因工程改造细胞:如过表达抗氧化酶或敲除特定基因的细胞,用于机制研究。
共培养体系:如胰岛β细胞与其他类型细胞的共培养,研究旁分泌相互作用下的毒性。
不同分化阶段细胞:如干细胞及其分化后的细胞,评估毒性对细胞分化的影响。
耐药性模型细胞:通过长期低剂量诱导获得的耐药细胞株,用于研究耐药机制。
MTT比色法:利用线粒体琥珀酸脱氢酶还原MTT形成紫色结晶,通过吸光度值反映活细胞数量。
CCK-8法:基于水溶性四唑盐被细胞内脱氢酶还原生成橙色甲瓒,灵敏度高且操作简便。
台盼蓝染色排除法:利用死细胞膜通透性增加而被染色的原理,在显微镜下直接计数活死细胞。
乳酸脱氢酶释放法:采用比色或荧光法检测从受损细胞释放到培养基中的LDH酶活性。
Annexin V/PI双染流式术:结合Annexin V标记磷脂酰丝氨酸和PI标记核酸,区分早晚期凋亡与坏死细胞。
Hoechst 33342/PI双染法:通过荧光显微镜观察细胞核形态(浓缩、碎裂)和膜完整性,判断凋亡与坏死。
JC-1荧光探针法:通过荧光颜色变化(红到绿)检测线粒体膜电位下降,常用流式或荧光显微镜分析。
DCFH-DA荧光探针法:非荧光性的DCFH-DA进入细胞后被ROS氧化生成绿色荧光DCF,用于检测ROS水平。
克隆形成实验:将低密度接种的细胞经药物处理后持续培养,固定染色并计数形成的集落数。
ATP生物发光法:基于萤光素酶系统,利用ATP依赖的发光反应定量测定细胞内ATP含量。
二氧化碳培养箱
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