流式细胞荧光分析

发布时间:2026-06-01 11:08:12

检测项目

细胞表面抗原检测:利用荧光标记的特异性抗体,对细胞膜表面的蛋白质(如CD分子)进行鉴定和定量分析。

细胞内因子检测:通过细胞固定和破膜技术,检测细胞质内产生的细胞因子、趋化因子等信号分子。

细胞核内抗原检测:针对位于细胞核内的蛋白质(如转录因子、增殖标志物Ki-67)进行染色和分析。

细胞周期分析:使用DNA染料(如PI)对细胞核DNA进行染色,通过DNA含量分布判断细胞所处的周期时相(G0/G1, S, G2/M)。

细胞凋亡检测:通过 Annexin V/PI 双染、Caspase活性检测等方法,早期识别和定量处于不同凋亡阶段的细胞。

细胞增殖追踪:使用CFSE或类似荧光染料标记细胞,通过染料在子代细胞中的稀释程度来追踪细胞分裂次数和增殖动力学。

钙离子流检测:采用钙离子敏感性荧光染料(如Fluo-3, Indo-1),实时监测细胞内钙离子浓度的动态变化。

活性氧检测:使用特异性荧光探针(如DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)的水平,反映细胞的氧化应激状态。

线粒体膜电位检测:应用JC-1、TMRE等染料评估线粒体膜电位的变化,常用于凋亡和细胞功能研究。

细胞吞噬功能检测:通过让细胞吞噬荧光微球或标记的细菌、碎片,定量分析巨噬细胞、中性粒细胞等吞噬细胞的吞噬能力。

检测范围

免疫学与血液学:用于免疫分型、白血病/淋巴瘤分型、淋巴细胞亚群计数、造血干细胞计数等临床诊断和免疫监测。

肿瘤学研究:应用于肿瘤细胞异质性分析、循环肿瘤细胞检测、肿瘤干细胞鉴定以及化疗药物敏感性测试。

药物研发与筛选:在高通量筛选中评估药物对细胞周期、凋亡、信号通路的影响,以及抗体药物的结合效率。

微生物学:对细菌、酵母等微生物进行计数、活力测定、抗生素敏感性测试以及复杂菌群分析。

海洋与环境科学:用于浮游植物分类、水体中微生物群落分析以及环境毒理学评估。

植物生物学:应用于植物原生质体分析、染色体倍性鉴定、花粉活力测定以及转基因植物的筛选。

基础细胞生物学:研究细胞信号转导、基因表达调控、蛋白质相互作用及亚细胞结构定位。

干细胞研究:用于干细胞的鉴定、纯化(分选)、多能性评估以及分化过程的跟踪。

疫苗研发:评估疫苗诱导的体液免疫(抗原特异性B细胞)和细胞免疫(抗原特异性T细胞)反应。

食品安全与质检:快速检测食品或饮料中的微生物污染,以及工业发酵过程中菌体状态的监控。

检测方法

样本制备与单细胞悬液获取:通过机械分散、酶消化等方法将组织或贴壁细胞制备成高质量的单细胞悬液,这是分析成功的前提。

荧光抗体标记(直接法):使用预先偶联了荧光素的单克隆抗体直接与靶抗原结合,步骤简单,非特异性结合少。

荧光抗体标记(间接法):先用一抗与抗原结合,再用荧光素标记的二抗进行识别和放大信号,适用于一抗未标记的情况。

细胞内染色: 使用固定剂(如多聚甲醛)固定细胞,并用破膜剂(如Triton X-100)处理,使抗体或染料能进入胞内与靶标结合。

死活细胞鉴别染色: 在染色前使用核酸染料(如PI、7-AAD)或胺基反应性染料排除死细胞,确保分析数据的准确性。

多色荧光配色 panel设计: 根据激光器、滤光片配置及荧光素光谱重叠特性,科学搭配多种抗体-荧光染料组合,实现多参数同时检测。

同型对照与Fc受体阻断: 使用同型对照抗体设置阴性对照,并可用Fc受体阻断剂减少非特异性结合,确保抗体结合的特异性。

补偿调节: 利用单阳性质控样本,在软件中调节各荧光通道之间的光谱重叠(补偿),是准确解析多色数据的关键步骤。

<强>设门策略: 在散点图或等高线图上依次设定逻辑门(如FSC/SSC门、死活门、单细胞门、阳性门),逐步圈定目标分析群体。

<强>数据分析与统计学处理: 对获取的荧光强度、细胞数量等数据进行统计分析,包括平均荧光强度、阳性百分比、几何均值等参数的计算和比较。

检测仪器设备

<强>流式细胞仪主机与分析模块: 仪器的核心部分,包含液流系统、光学系统和电子系统,负责细胞的传输、激发和信号采集。

<强>空气冷却/水冷却激光器: 提供单色性好的高强度激光作为激发光源,常见有蓝色(488nm)、红色(633/640nm)、紫色(405nm)等波长激光器。

<强>流动室与液流聚焦系统: 使样本流在鞘液的包裹下形成稳定的单列细胞流,确保细胞逐个通过激光检测区。

<强>前向角散射光探测器: 检测激光照射细胞后产生的微小角度散射光,其强度与细胞的尺寸大小相关。

<强>侧向角散射光探测器: 检测激光照射细胞后产生的大角度散射光,其强度与细胞内颗粒复杂度(如颗粒性)相关。

<强>光电倍增管及滤光片系统: PMT将微弱的荧光信号转换为电信号并进行放大;滤光片组(带通、长通、短通)则用于选择特定波长的光进入探测器。

<强>分选模块(适用于流式分选仪): 包含压电晶体振荡器、液滴充电电极和偏转板,能够根据设定参数将目标细胞分选至收集管中。

<强>鞘液压力与真空系统: 提供稳定压力的鞘液以形成层流,并产生负压以精确控制样本的吸入速度。

<强>计算机控制系统与专业软件: 控制仪器所有参数设置、实时显示数据、进行补偿调节和数据采集,并具备强大的离线分析功能。

<强>校准微球与质控品: 用于日常仪器的性能校准(如光路对齐、CV值检查)和实验过程的质控,确保数据结果的可靠性和重复性。

检测服务流程

沟通检测需求:为精准把握客户需求,我们会仔细审核申请内容,与客户深入交流,精准识别样品类型、明确测试要求,全面收集相关信息,确保无遗漏。

签订协议:根据沟通确定的检测需求及商定的服务细节,为客户定制包含委托书及保密协议的个性化协议。后续检测严格依协议执行。

样品前处理:收到样品后,开展样品预处理、制样及标准溶液制备等前处理工作。凭借先进仪器设备和专业技术人员,科学严谨对待每个细节,保证前处理规范准确。

试验测试:此为检测核心环节。运用规范实验测试方法精确检测每个样品,实验设计与操作均遵循科学标准,保障测试结果准确且可重复。

出具报告:测试结束立即生成详尽检测报告,经严格审核确保结果可靠准确,审核通过后交付客户。

我们秉持严谨踏实的态度,提供高品质、专业化检测服务。服务全程可追溯,严格遵守保密协议,保障客户满意度与信任度。

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