细胞增殖活性评估：通过测定甲瓒生成量，定量评估细胞在特定条件下的增殖能力。
药物细胞毒性筛选：检测不同浓度药物处理对细胞存活率的影响，评估药物的毒性或抑制效果。
细胞因子生物活性测定：评估生长因子、白细胞介素等因子对细胞增殖的促进或抑制作用。
放射或物理因素敏感性：测定细胞经辐射、热疗等物理因素处理后的存活情况。
基因功能研究：通过转染、敲除等基因操作后，检测细胞增殖表型的变化。
材料生物相容性测试：评估生物材料浸提液或材料表面培养对细胞存活的影响。
血清或培养基质控：比较不同批次血清或培养基对细胞生长支持能力的差异。
肿瘤细胞化疗敏感性：临床前研究常用，用于筛选对特定肿瘤细胞有效的化疗方案。
抗氧化或保护作用研究：检测特定化合物对氧化应激等损伤条件下细胞的保护效应。
细胞凋亡与坏死初步判断：存活率显著下降常提示细胞发生凋亡或坏死，需结合其他实验确认。
贴壁培养的哺乳动物细胞系：如HeLa、HEK293、HepG2等，是MTT法最常用的检测对象。
悬浮生长的哺乳动物细胞：如淋巴细胞、某些白血病细胞系，需在离心后小心操作。
原代培养细胞：包括从组织分离的各类原代细胞，但需注意其增殖能力可能较弱。
植物原生质体：经过方法优化后，也可用于评估植物细胞的活力。
微生物细胞（有限种类）：如酵母菌，但其细胞壁可能影响MTT进入，需特殊处理。
三维培养细胞球：如肿瘤球体，但MTT渗透和甲瓒溶解可能不完全，结果需谨慎解读。
共培养体系：用于评估两种或多种细胞相互作用下的整体增殖情况。
药物浓度梯度筛选：通常设置6-8个浓度梯度，覆盖从无效到完全抑制的范围。
时间动力学研究：可在处理后的不同时间点（如24、48、72小时）连续检测。
大规模化合物库初筛：因其操作相对简便，适用于高通量筛选的初步阶段。
细胞接种与培养：将对数生长期细胞以适宜密度接种于96孔板，在CO2培养箱中培养至贴壁。
实验因素处理：吸弃旧培养基，加入含不同浓度药物或处理因素的新鲜培养基继续培养。
MTT溶液添加：处理结束后，每孔加入适量MTT溶液（终浓度通常为0.5 mg/mL），继续孵育2-4小时。
甲瓒结晶形成：活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶将黄色MTT还原为不溶于水的紫色甲瓒结晶。
终止反应与溶解：小心吸弃上清液，每孔加入二甲基亚砜（DMSO）溶解甲瓒结晶。
振荡混匀：将培养板置于平板振荡器上低速振荡10-15分钟，确保结晶完全溶解且溶液均匀。
吸光度测定：使用酶标仪在490 nm（参考波长570-650 nm）处测定各孔的吸光度值。
数据计算与分析：以空白组调零，计算实验组相对于对照组的细胞存活率百分比。
设置复孔与对照：每组至少设3个复孔，并设置空白孔（仅培养基和MTT）、对照孔（未处理细胞）。
结果验证与排除干扰：对于可能干扰MTT反应的物质（如还原剂），需设立额外对照验证结果特异性。
二氧化碳培养箱：为细胞提供恒定的温度（37℃）、湿度和CO2浓度（通常5%）的生长环境。
超净工作台或生物安全柜：提供无菌操作环境，防止细胞培养过程中被污染。
倒置显微镜：用于观察细胞形态、贴壁状况、密度以及处理后的变化。
酶标仪（微孔板读数仪）：核心设备，用于快速、准确地测定96孔板各孔在特定波长下的吸光度。
微量移液器及无菌吸头：用于精确移取培养基、MTT溶液、DMSO等液体，量程需覆盖1-1000 μL。
96孔细胞培养板：实验的主要载体，通常使用平底透明板，需保证细胞贴壁均匀。
平板振荡器：用于溶解甲瓒结晶时混匀孔内液体，确保吸光度读数稳定。
离心机（针对悬浮细胞）：用于悬浮细胞MTT实验前的收集、洗涤和重新悬浮。
高压蒸汽灭菌锅：用于实验相关器械、耗材（如吸头、溶液）的灭菌处理。
冰箱与冷冻柜：用于储存细胞、培养基、血清、MTT试剂及其他生化试剂。
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