全基因组测序分析:利用高通量测序技术对编辑后的细胞或组织进行全基因组扫描,识别所有可能的脱靶位点,确保检测覆盖整个基因组,避免遗漏潜在风险区域。
靶向测序验证:针对预测出的脱靶位点进行深度测序,验证编辑事件的真实性和频率,提高检测准确性,减少假阳性或假阴性结果。
生物信息学预测:通过 computational tools 分析基因序列相似性,预测潜在脱靶位点,为实验验证提供指导,优化检测流程效率。
细胞毒性检测:评估基因编辑过程对细胞存活率和功能的影响,确保脱靶效应不导致细胞死亡或异常,维持实验可靠性。
off-target site identification:结合实验和计算 methods 精确定位非预期编辑位置,包括插入、缺失或点突变,全面评估编辑特异性。
编辑效率评估:测量目标位点的编辑成功率,对比脱靶事件频率,量化编辑技术的精准度,为安全性提供数据支持。
突变频率计算:统计脱靶位点的突变发生率,使用统计学方法分析数据,确定显著性阈值,避免随机误差干扰。
功能验证实验:通过功能 assays 如蛋白表达或细胞表型测试,确认脱靶突变是否影响生物功能,增强检测的生物学相关性。
表型分析:观察编辑后细胞的形态和行为变化,检测脱靶效应导致的异常表型,确保无 unintended consequences。
安全性评估:综合所有检测数据,评估脱靶效应对整体安全性的影响,为临床应用或研究提供风险报告。
人类细胞系:包括 immortalized cell lines 如 HEK293,用于模拟人体环境,检测脱靶效应在多种细胞类型中的表现。
动物模型组织:如小鼠或大鼠的肝脏、脑组织,用于 in vivo 验证脱靶效应,评估编辑技术在活体中的安全性。
植物基因组:针对农作物如水稻或玉米,检测基因编辑脱靶对植物生长和性状的影响,确保农业应用安全。
基因治疗产品:包括 viral vectors 或 edited cells,用于临床前测试,确保治疗剂不会引起脱靶突变。
干细胞衍生细胞:如 iPSC-derived neurons,用于再生医学研究,检测编辑后细胞的稳定性和安全性。
微生物基因组:如细菌或酵母,用于工业生物技术应用,评估编辑脱靶对代谢途径的影响。
胚胎干细胞:用于早期发育研究,检测脱靶效应是否影响胚胎发育和多能性。
器官oid模型:3D 细胞培养系统模拟器官功能,测试编辑脱靶在复杂组织环境中的效应。
血液样本:从患者或 donors 获取,用于检测编辑后血细胞的脱靶突变,评估血液疾病治疗安全性。
环境样本DNA:如土壤或水中的微生物DNA,用于生态风险评估,检测基因编辑扩散的潜在脱靶效应。
ISO 20395:2019 Biotechnology — Requirements for evaluating the performance of quantification methods for nucleic acid target sequences—qPCR and dPCR:规定了核酸定量方法的性能评估要求,适用于脱靶检测中的qPCR和dPCR验证,确保数据准确性和可比性。
ASTM E3025-16 JianCe Guide for Tiered Approach to Detection and Characterization of Nucleic Acid Sequence Variants:提供了核酸序列变异检测的分层方法指南,用于系统评估脱靶效应,包括预测和实验步骤。
GB/T 34796-2017 核酸定量测定方法通则:中国国家标准,规范了核酸定量测定的通用方法,适用于脱靶检测中的样本处理和数据分析。
ISO 10993-22:2017 Biological evaluation of medical devices — Part 22: Guidance on nanomaterials:虽针对医疗器械,但提供纳米材料评估指南,可用于基因编辑载体如纳米颗粒的脱靶安全性检测。
GB/T 37871-2019 生物样本库样本质量控制通则:规定了生物样本的质量控制要求,确保脱靶检测所用样本的完整性和可靠性。
ASTM WK65041 New Guide for Assessment of Gene Editing Technologies:正在开发的标准指南,旨在评估基因编辑技术的安全性和有效性,包括脱靶效应检测方法。
ISO 17025:2017 General requirements for the competence of testing and calibration laboratories:提供了实验室能力的一般要求,确保脱靶检测过程符合国际质量 standards。
GB/T 30989-2014 高通量测序数据质量控制:中国国家标准,规范了高通量测序数据的质量控制流程,适用于脱靶检测中的序列数据分析。
高通量测序仪:能够并行测序数百万个DNA片段,用于全基因组扫描脱靶位点,提供高覆盖度和准确度的序列数据。
实时荧光定量PCR仪:通过荧光信号检测特定DNA序列的扩增,用于验证脱靶位点的存在和频率,确保检测灵敏度和特异性。
流式细胞仪:分析细胞表面和内部标记物,用于评估编辑后细胞的表型和存活率,检测脱靶效应导致的细胞变化。
显微镜成像系统:提供高分辨率细胞图像,用于观察编辑后细胞的形态学变化,识别脱靶相关的异常结构。
生物分析仪:自动分析核酸样本的质量和浓度,确保脱靶检测所用样本的完整性,避免降解影响结果。
核酸提取仪:自动化提取DNA或RNA from samples,提高样本处理效率,减少人为误差在脱靶检测中。
细胞培养箱:提供 controlled environment for cell growth,用于维持编辑细胞 viability during脱靶验证实验。
沟通检测需求:为精准把握客户需求,我们会仔细审核申请内容,与客户深入交流,精准识别样品类型、明确测试要求,全面收集相关信息,确保无遗漏。
签订协议:根据沟通确定的检测需求及商定的服务细节,为客户定制包含委托书及保密协议的个性化协议。后续检测严格依协议执行。
样品前处理:收到样品后,开展样品预处理、制样及标准溶液制备等前处理工作。凭借先进仪器设备和专业技术人员,科学严谨对待每个细节,保证前处理规范准确。
试验测试:此为检测核心环节。运用规范实验测试方法精确检测每个样品,实验设计与操作均遵循科学标准,保障测试结果准确且可重复。
出具报告:测试结束立即生成详尽检测报告,经严格审核确保结果可靠准确,审核通过后交付客户。
我们秉持严谨踏实的态度,提供高品质、专业化检测服务。服务全程可追溯,严格遵守保密协议,保障客户满意度与信任度。