
DNA-蛋白质相互作用验证检测包含三大核心项目:
结合位点鉴定:通过染色质免疫沉淀测序(ChIP-seq)或DNA足迹法确定蛋白质在DNA链上的特异性结合区域
结合亲和力测定:采用表面等离子体共振(SPR)或等温滴定量热法(ITC)量化相互作用强度
动态互作分析:利用荧光共振能量转移(FRET)或单分子追踪技术研究实时结合动力学
结构解析:通过X射线晶体学或冷冻电镜获取复合物三维构象信息
本检测适用于以下研究领域:
转录因子与启动子/增强子区域的特异性识别
表观遗传调控蛋白与甲基化/乙酰化DNA的相互作用
DNA修复酶与损伤位点的动态结合过程
病毒整合酶与宿主基因组的整合机制研究
抗癌药物与DNA-蛋白复合物的干扰效应评估
适用样本涵盖原代细胞、肿瘤组织切片、重组蛋白体系及合成DNA探针等多种类型。
电泳迁移率变动分析(EMSA):基于蛋白-DNA复合物在凝胶电泳中的迁移差异进行定性检测
DNase I足迹实验:通过核酸酶保护效应定位精确结合位点
Southwestern blotting:膜固定蛋白与标记DNA探针的特异性结合检测
ChIP-seq技术流程:
甲醛交联固定DNA-蛋白复合物
超声破碎获取200-500bp染色质片段
特异性抗体免疫沉淀目标复合物
建库测序及生物信息学分析
CUT&Tag技术:通过Tn5转座酶实现靶向染色质片段化与测序文库构建
表面等离子体共振(SPR):实时监测结合/解离动力学参数(ka, kd, KD)
微量热泳动(MST):基于荧光信号变化测定溶液环境中的结合常数
原子力显微镜(AFM):纳米级分辨率观测复合物形貌特征