肽段序列质谱解析

发布时间:2026-05-13 10:54:35

检测项目

肽段分子量测定:精确测定待分析肽段的质荷比(m/z),是后续序列推导的基础数据。

肽段碎片离子鉴定:识别并归属由肽键断裂产生的b系列、y系列等碎片离子,是序列拼接的关键。

氨基酸组成分析:通过高精度质谱数据推断肽段中所含氨基酸的种类及其大致比例。

翻译后修饰鉴定:检测磷酸化、糖基化、甲基化等修饰,确定修饰类型和具体位点。

肽段从头测序:在不依赖数据库的情况下,直接根据碎片离子谱图推导出完整的氨基酸序列。

数据库搜索匹配:将实验质谱图与理论蛋白质/肽段数据库生成的谱图进行比对,找到最匹配的序列。

蛋白质鉴定:通过解析一个或多个肽段的序列,反向推导出其所属的母体蛋白质。

序列变异分析:检测肽段序列中是否存在单氨基酸变异(SAV)或突变。

二硫键定位:确定肽链内或肽链间二硫键的连接位置,解析高级结构信息。

定量信息获取:结合稳定同位素标记或非标记技术,在解析序列的同时获得肽段的相对或绝对丰度。

检测范围

蛋白质组学研究:大规模鉴定和定量复杂生物样品(如细胞、组织、体液)中的全部蛋白质。

生物标志物发现:从临床样本中寻找与疾病诊断、预后相关的特征性肽段/蛋白质。

药物靶点验证:解析药物作用后靶蛋白及其相互作用蛋白的肽段序列变化,确认作用机制。

抗体表征:精确测定治疗性抗体的互补决定区(CDR)序列及关键修饰,确保产品质量。

重组蛋白药物分析:对生物制药产品进行肽图分析,确认氨基酸序列的正确性和一致性。

食品过敏原检测:鉴定食品中微量的致敏蛋白来源,通过特征肽段进行精准溯源。

微生物鉴定:基于微生物物种特有的“指纹肽段”进行快速、准确的物种鉴定。

法医蛋白质分析:从毛发、骨骼等微量物证中提取并解析蛋白质肽段,用于个体识别。

植物与农业科学:研究作物抗逆性、品质形成等相关功能蛋白的序列与修饰。

古蛋白质组学:解析古代生物遗存中残存蛋白质的肽段序列,用于进化与考古研究。

检测方法

胰蛋白酶酶解:最常用的样品前处理方法,使用胰蛋白酶在精氨酸(R)和赖氨酸(K)位点特异性切割蛋白质,生成适合质谱分析的肽段。

液相色谱分离:采用反相液相色谱(如纳升液相色谱)在质谱分析前对复杂肽段混合物进行分离,降低基质干扰。

电喷雾电离:将液相中的肽段溶液雾化成带电液滴,经过去溶剂化形成气相肽段离子,适用于大分子和极性分子。

基质辅助激光解吸电离:将肽段与吸光基质混合,用激光照射使肽段电离,常用于简单混合物的快速分析。

串联质谱分析:通过MS1选择特定肽段母离子,碰撞诱导解离产生碎片离子,再由MS2进行检测,获得序列信息。

碰撞诱导解离:通过惰性气体碰撞使肽段母离子内能增加,导致其沿肽键断裂,产生b、y系列碎片。

高能碰撞解离:提供更高的碰撞能量,能产生更丰富的碎片类型,尤其有利于翻译后修饰位点的鉴定。

电子转移解离:通过电子转移反应使肽段离子解离,能更好地保留不稳定的翻译后修饰信息,并产生c、z系列碎片。

数据依赖性采集:MS1全扫描中自动选择强度最高的若干离子进行串联质谱分析,是蛋白质组学的标准采集模式。

数据非依赖性采集:将质荷比窗口内的所有离子同时碎裂并检测,无偏好性,能获得更全面的肽段信息,重现性更好。

检测仪器设备

纳升液相色谱仪:提供超低流速(nL/min)的液相分离系统,极大提高电离效率和检测灵敏度。

电喷雾离子源:实现液相到气相的接口,将肽段溶液转化为气相离子的关键部件。

基质辅助激光解吸电离靶板:承载样品与基质共结晶点的金属靶板,是MALDI-MS的核心进样部件。

四极杆质量分析器:通过射频电场筛选特定m/z的离子,常用于离子选择或作为三重四极杆质谱的一部分。

飞行时间质量分析器:根据离子飞行时间测定m/z,具有高质量精度、高分辨率和宽质量范围的特点。

轨道阱质量分析器:离子在静电场中做复杂轨道运动,通过感应电流频率测定m/z,具有极高的分辨率和质量精度。

离子阱质量分析器:可捕获并存储离子,能进行多级串联质谱分析,但分辨率通常较低。

串联质谱联用系统:如Q-TOF、Orbitrap Fusion等,将不同质量分析器组合,兼具高分辨率、高灵敏度和多级碎裂能力。

碰撞室:填充惰性气体(如氩气),用于进行CID或HCD碎裂,是产生序列碎片的关键区域。

高灵敏度检测器:如电子倍增器或高动态范围检测器,用于将离子信号转化为可测量的电信号。

检测服务流程

沟通检测需求:为精准把握客户需求,我们会仔细审核申请内容,与客户深入交流,精准识别样品类型、明确测试要求,全面收集相关信息,确保无遗漏。

签订协议:根据沟通确定的检测需求及商定的服务细节,为客户定制包含委托书及保密协议的个性化协议。后续检测严格依协议执行。

样品前处理:收到样品后,开展样品预处理、制样及标准溶液制备等前处理工作。凭借先进仪器设备和专业技术人员,科学严谨对待每个细节,保证前处理规范准确。

试验测试:此为检测核心环节。运用规范实验测试方法精确检测每个样品,实验设计与操作均遵循科学标准,保障测试结果准确且可重复。

出具报告:测试结束立即生成详尽检测报告,经严格审核确保结果可靠准确,审核通过后交付客户。

我们秉持严谨踏实的态度,提供高品质、专业化检测服务。服务全程可追溯,严格遵守保密协议,保障客户满意度与信任度。

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