
m6A(N6-甲基腺苷)定量:检测RNA分子中腺苷第6位氮原子发生甲基化的修饰水平,是哺乳动物中最丰富的mRNA修饰。
m5C(5-甲基胞嘧啶)定量:定量RNA中胞嘧啶第5位碳原子的甲基化修饰,常见于tRNA、rRNA和mRNA。
m1A(N1-甲基腺苷)定量:测量腺苷第1位氮原子的甲基化修饰,对tRNA结构和翻译保真度有重要影响。
Ψ(假尿苷)定量:检测尿苷通过碳-碳糖苷键连接的异构化修饰,广泛存在于非编码RNA中。
hm5C(5-羟甲基胞嘧啶)定量:定量5-甲基胞嘧啶进一步氧化生成的羟甲基化修饰,是潜在的动态修饰。
ac4C(N4-乙酰胞苷)定量:测量胞苷第4位氮原子的乙酰化修饰,可影响mRNA的稳定性和翻译效率。
m7G(N7-甲基鸟苷)定量:检测mRNA 5‘帽结构及内部鸟苷第7位氮原子的甲基化水平。
Am(2’-O-甲基腺苷)定量:定量核糖2‘-羟基位置的甲基化修饰,常见于rRNA和snRNA。
整体甲基化水平分析:对样本中总RNA或特定RNA的总体甲基化修饰丰度进行全局性评估。
位点特异性定量分析:精确定量特定RNA序列上单个或多个特定位点的甲基化修饰比例。
信使RNA(mRNA):主要检测m6A、m5C、m1A等与翻译调控、稳定性相关的修饰。
转运RNA(tRNA):涵盖m1A、m5C、Ψ等多种修饰,对tRNA折叠和功能至关重要。
核糖体RNA(rRNA):主要检测2‘-O-甲基化及假尿苷化,影响核糖体组装和功能。
长链非编码RNA(lncRNA):分析其上的各类甲基化修饰,探索其在基因表达调控中的作用。
微小RNA(miRNA):检测前体及成熟miRNA上的修饰,研究其对生物生成及功能的调控。
环状RNA(circRNA):探索这类特殊RNA分子上是否存在特定的甲基化修饰模式。
小核RNA(snRNA):主要分析其2‘-O-甲基化修饰,与剪接体功能相关。
线粒体RNA(mtRNA):检测线粒体基因组转录本上的修饰,研究其在线粒体功能中的作用。
病毒RNA:分析病毒RNA基因组的甲基化状态,研究其与宿主免疫互作及病毒生命周期的关系。
细胞外RNA(如外泌体RNA):检测分泌到细胞外的RNA的修饰谱,用于生物标志物研究。
液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS):金标准方法,通过酶解RNA为单核苷,定量特定修饰核苷的绝对含量。
基于抗体的免疫沉淀法(如MeRIP-seq/m6A-seq):利用特异性抗体富集甲基化RNA片段,结合高通量测序进行全转录组定位与相对定量。
基于酶的检测法(如m6A-REF-seq):利用对修饰敏感/不敏感的内切酶区分修饰位点,实现单碱基分辨率的检测。
化学标记与测序法(如DART-seq):利用工程化酶或化学方法对修饰碱基进行标记,进而通过测序信号识别。
逆转录终止法:利用某些修饰会引发明确定义的逆转录终止或突变,通过测序深度分析修饰比例。
斑点杂交法(Dot Blot):使用修饰特异性抗体对固定在膜上的RNA样本进行半定量检测,快速但通量低。
酶联免疫吸附法(ELISA):基于抗体-抗原反应,对RNA酶解液中的修饰核苷进行定量,适合批量样本筛查。
实时荧光定量PCR(qPCR)结合免疫沉淀:对免疫沉淀后的特定RNA进行qPCR定量,用于验证特定转录本的修饰变化。
第三代测序直接检测法(如纳米孔测序):利用电信号差异直接识别RNA修饰,无需免疫沉淀或化学处理,是前沿技术。
电化学传感法:开发特异性探针或适配体,通过电化学信号变化对修饰进行定量,具有快速、便携的潜力。
高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪(HPLC-MS/MS):进行LC-MS/MS分析的核心设备,提供高灵敏度、高特异性的绝对定量。
高通量测序仪(NGS Platform):如Illumina NovaSeq等,用于对免疫沉淀或化学处理后的文库进行深度测序。
纳米孔测序仪(如Oxford Nanopore设备):用于直接RNA测序,有望实现对多种RNA修饰的原位检测。
实时荧光定量PCR仪:用于对目标RNA进行精确定量,常与免疫沉淀技术联用。
酶标仪:用于读取ELISA等实验的吸光度或荧光信号,实现批量样本的快速检测。
核酸蛋白定量仪:用于精确测定RNA样本的浓度和纯度,是定量实验的前期质量保证。
凝胶成像系统:用于观察和分析琼脂糖凝胶电泳或Dot Blot的结果。
超声波破碎仪:用于在免疫沉淀前将长链RNA随机打断至合适大小。
磁力架:用于MeRIP-seq等实验中与磁珠结合的RNA-抗体复合物的快速分离与清洗。
生物分析仪(如Agilent 2100):用于评估RNA样本完整性、测序文库片段大小分布,确保数据质量。
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