凋亡率流式测试

发布时间:2026-03-20 16:51:04

检测项目

早期凋亡细胞比例:检测细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻但细胞膜完整的细胞群体,是凋亡的早期标志。

晚期凋亡/坏死细胞比例:检测细胞膜完整性丧失的细胞群体,包括晚期凋亡和继发性坏死细胞。

总凋亡率:早期凋亡与晚期凋亡/坏死细胞比例的总和,反映总的细胞凋亡水平。

活细胞比例:细胞膜完整且未发生磷脂酰丝氨酸外翻的健康细胞群体。

线粒体膜电位变化:通过荧光探针检测线粒体跨膜电位下降,是凋亡早期的关键事件。

Caspase-3/7活性:检测凋亡执行阶段关键蛋白酶Caspase-3和Caspase-7的激活情况。

DNA片段化分析:通过检测亚G1期峰来评估凋亡导致的DNA断裂和含量减少。

Annexin V单阳性细胞:仅Annexin V染色阳性,代表典型的早期凋亡细胞。

PI单阳性细胞:仅碘化丙啶染色阳性,通常代表坏死细胞或晚期凋亡细胞。

Annexin V/PI双阳性细胞:两种染料均染色阳性,代表晚期凋亡或继发性坏死细胞。

检测范围

悬浮培养细胞:如淋巴细胞、白血病细胞系等,是最常用且易于处理的样本类型。

贴壁培养细胞:需要温和的消化处理使其成为单细胞悬液,且需注意消化对膜蛋白的影响。

动物组织样本:如脾脏、胸腺、肿瘤组织等,需通过机械分离和酶消化制备单细胞悬液。

外周血单个核细胞:从人或动物外周血中分离得到的淋巴细胞、单核细胞等。

骨髓细胞:用于研究血液系统疾病、药物毒性等对造血细胞凋亡的影响。

植物原生质体:适用于植物细胞凋亡及相关信号通路的研究。

酵母细胞:用于研究真菌的程序性细胞死亡机制。

临床活检样本:来自肿瘤或其他病变组织的微量样本,需高效制备单细胞悬液。

药物筛选模型细胞:用于评估化疗药物、靶向药物等对特定细胞凋亡的诱导作用。

干细胞与祖细胞:研究发育、分化过程中或应激条件下的凋亡情况。

检测方法

Annexin V-FITC/PI双染法:最经典的方法,利用Annexin V结合磷脂酰丝氨酸,PI标记死细胞,通过流式细胞术区分不同状态细胞。

Caspase活性检测法:使用荧光标记的Caspase底物或抗体,通过流式检测细胞内活化的Caspase来指示凋亡。

线粒体膜电位检测法(JC-1法):JC-1探针在电位正常时形成红色荧光聚集体,电位下降时变为绿色荧光单体,红绿荧光比可反映电位变化。

TUNEL法:末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法,特异性标记凋亡细胞中断裂的DNA 3‘-OH末端。

亚G1峰分析法:用PI染色固定后的细胞,由于凋亡细胞DNA断裂丢失,其DNA含量低于G1期细胞,在流式直方图上形成亚G1峰。

AO/EB双染法:吖啶橙和溴化乙锭染色,在荧光显微镜下区分活细胞、早期凋亡、晚期凋亡和坏死细胞,也可进行流式分析。

Hoechst 33342/PI双染法:Hoechst 33342可穿透活细胞膜对DNA染色,其荧光强度变化及与PI结合情况可用于分析凋亡。

Annexin V-APC/7-AAD法:使用别藻蓝蛋白标记的Annexin V和核酸染料7-AAD进行多色流式分析,适用于多参数检测。

荧光蛋白报告基因法:构建与凋亡标志物(如caspase切割位点)连接的荧光蛋白报告载体,转染细胞后通过荧光变化监测凋亡。

多参数流式细胞术联用:将Annexin V/PI染色与细胞表面标志物、细胞内蛋白染色结合,在特定细胞亚群中分析凋亡。

检测仪器设备

流式细胞仪:核心设备,用于检测荧光信号并分析细胞群体,需配备488nm(常用)及其他波长激光器。

荧光显微镜:用于观察和初步判断Annexin V/PI等染色的细胞形态与荧光分布。

低速离心机

低速离心机:用于细胞的洗涤、重悬等步骤,通常需要带有控温功能的型号。

生物安全柜或超净工作台:为细胞操作提供无菌环境,防止样本污染。

CO2培养箱:用于培养待检测的活细胞,维持恒定的温度、湿度和CO2浓度。

涡旋振荡器:用于充分混匀细胞悬液或试剂,确保样本均一性。

移液器与无菌吸头:用于精确移取细胞悬液、缓冲液及各种染料试剂。

流式上样管:专用的圆底或尖底试管,适用于流式细胞仪的上样系统。

300目尼龙网筛:用于过滤制备的单细胞悬液,去除细胞团块和杂质,防止堵塞仪器管路。

水浴锅或金属浴

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检测服务流程

沟通检测需求:为精准把握客户需求,我们会仔细审核申请内容,与客户深入交流,精准识别样品类型、明确测试要求,全面收集相关信息,确保无遗漏。

签订协议:根据沟通确定的检测需求及商定的服务细节,为客户定制包含委托书及保密协议的个性化协议。后续检测严格依协议执行。

样品前处理:收到样品后,开展样品预处理、制样及标准溶液制备等前处理工作。凭借先进仪器设备和专业技术人员,科学严谨对待每个细节,保证前处理规范准确。

试验测试:此为检测核心环节。运用规范实验测试方法精确检测每个样品,实验设计与操作均遵循科学标准,保障测试结果准确且可重复。

出具报告:测试结束立即生成详尽检测报告,经严格审核确保结果可靠准确,审核通过后交付客户。

我们秉持严谨踏实的态度,提供高品质、专业化检测服务。服务全程可追溯,严格遵守保密协议,保障客户满意度与信任度。

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