总蛋白定量：通过BCA或Bradford法测定样品中总蛋白浓度，确保上样量一致，是实验准确性的基础。
蛋白样品制备：从细胞或组织中裂解并提取目标蛋白，同时保持其天然状态和抗原性。
SDS-PAGE凝胶电泳：根据分子量大小，在聚丙烯酰胺凝胶中将蛋白质混合物分离成单一组分。
蛋白转膜：将凝胶中分离的蛋白质条带转移至固相支持物（如PVDF膜或NC膜）上。
膜封闭：使用脱脂奶粉或BSA溶液封闭膜上的非特异性结合位点，减少背景信号。
一抗孵育：使用针对目标蛋白的特异性一抗与膜上的靶蛋白进行特异性结合。
二抗孵育：使用与一抗种属匹配、并偶联了报告酶（如HRP）的二抗进行孵育，用于信号放大。
化学发光检测：通过底物与报告酶反应产生化学发光信号，从而可视化目标蛋白条带。
内参蛋白检测：检测如β-actin、GAPDH等表达稳定的管家蛋白，用于校正上样量和实验误差。
结果分析与定量：使用图像分析软件对条带的光密度值进行定量分析，比较不同样品间目标蛋白的相对表达量。
分子量范围：通常可检测分子量在5 kDa至250 kDa之间的蛋白质，具体取决于凝胶浓度和电泳条件。
组织样本：适用于从动物（如小鼠、大鼠）或人体手术获取的各种新鲜或冻存组织样本。
细胞样本：适用于贴壁细胞、悬浮细胞、原代细胞及各种细胞系裂解后的蛋白样品。
蛋白修饰检测：可特异性检测蛋白质的磷酸化、乙酰化、甲基化、泛素化等多种翻译后修饰。
表达水平分析：用于比较不同处理组、不同发育阶段或不同病理状态下特定蛋白的表达差异。
亚细胞定位验证：通过分离细胞质、细胞核、线粒体等组分，验证目标蛋白的亚细胞定位。
蛋白相互作用验证：结合免疫共沉淀技术，验证蛋白复合物的存在或蛋白间的相互作用。
抗体特异性验证：是验证抗体能否特异性识别目标靶蛋白及其是否存在交叉反应的关键方法。
疾病标志物筛选：在基础医学研究中，用于筛选和验证潜在的疾病诊断或预后生物标志物。
药物作用靶点验证：在药理学研究中，用于验证药物是否影响特定信号通路中关键蛋白的表达或活性。
SDS-PAGE电泳法：在变性条件下，利用十二烷基硫酸钠使蛋白质带负电，根据分子量大小进行分离。
湿式转印法：将凝胶和膜浸泡在转印缓冲液中，通过电场作用将蛋白质从凝胶转移至膜上，适用于大多数蛋白。
半干式转印法：使用浸有缓冲液的滤纸作为介质，在凝胶和膜之间直接通电转印，速度快但可能不适用于大分子蛋白。
Tris-Glycine系统：最经典的SDS-PAGE缓冲系统，适用于广泛分子量范围的蛋白质分离。
Tris-Tricine系统：专门用于分离小分子量多肽（小于10 kDa）的凝胶电泳系统。
梯度凝胶电泳：使用丙烯酰胺浓度从上到下递增的梯度凝胶，可在同一块胶上获得更宽分子量范围的清晰分离。
化学发光法：最常用的检测方法，利用HRP催化鲁米诺等底物产生光信号，灵敏度高，动态范围宽。
荧光检测法：使用荧光染料标记的二抗，通过特定波长激发产生荧光信号，可进行多重检测。
显色底物法：使用HRP或AP催化产生不溶性有色沉淀（如DAB），直接在膜上显色，无需成像仪但灵敏度较低。
Strip与Reprobe：使用特定的洗脱液将膜上已结合的一抗二抗剥离，然后重新用其他抗体进行孵育检测。
垂直电泳槽：用于进行SDS-PAGE凝胶电泳的核心装置，提供稳定的电场环境分离蛋白质。
转印仪：提供稳定电场，用于将凝胶中的蛋白质条带转移至固相膜上的关键设备，分为湿转和半干转两种类型。
化学发光成像系统：核心检测设备，配备高灵敏度CCD相机和暗箱，用于捕获和记录化学发光或荧光信号。
微量分光光度计：用于精确测量微量蛋白样品在特定波长下的吸光度，从而计算蛋白浓度。
水平摇床：在孵育和洗膜过程中，用于保证抗体或缓冲液与膜充分、均匀接触的常用设备。
制胶器与玻璃板：用于灌制SDS-PAGE分离胶和浓缩胶的模具组件，要求平整、密封性好。
电源：为电泳和转印过程提供稳定、可调电压和电流的直流电源，是实验安全运行的保障。
脱色摇床：用于电泳后凝胶的染色、脱色或转印后膜的封闭、孵育和洗涤过程。
冰箱与冷冻柜：用于储存细胞组织样本、提取的蛋白样品、抗体及各种生化试剂，确保其稳定性。
分析天平与pH计：用于精确称量试剂和配制各种缓冲液，确保溶液浓度和pH值的准确性，是实验可重复性的基础。
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