检测项目
总RNA提取与质量评估:采用有机溶剂法或离心柱法从细胞或组织中分离总RNA,并通过微量分光光度计和琼脂糖凝胶电泳评估其浓度、纯度及完整性。
mRNA富集与纯化:利用寡核苷酸dT磁珠或纤维素柱特异性结合真核生物mRNA的polyA尾,从而分离去除核糖体RNA等杂质,提高后续检测的灵敏度。
基因组DNA去除:在反转录反应前使用不含RNase的DNaseI处理RNA样本,彻底降解残留的基因组DNA,防止其对后续PCR定量结果产生假阳性干扰。
反转录合成cDNA:以纯化的mRNA为模板,依赖逆转录酶的活性,使用随机引物、Oligo dT或基因特异性引物将其反转录成更稳定的互补DNA链。
实时荧光定量PCR:基于SYBR Green染料或TaqMan探针技术,在PCR扩增过程中实时监测荧光信号强度,通过循环阈值定量起始模板的拷贝数。
数字PCR绝对定量:将cDNA样本进行极限稀释并分配到大量独立反应单元中,通过终点法PCR计数阳性反应数,实现目标基因拷贝数的绝对定量而不依赖标准曲线。
内参基因的选择与验证:筛选在实验条件下表达稳定的看家基因作为内参,用于校正样本间加样量、反转录效率以及RNA质量的差异,确保定量结果的可靠性。
引物与探针设计与验证:根据目标基因序列设计特异性引物和探针,并通过熔解曲线分析或琼脂糖凝胶电泳验证其扩增效率和特异性,避免非特异性扩增或引物二聚体形成。
相对定量ΔΔCt法分析:将目标基因的Ct值与内参基因的Ct值进行比较,通过计算ΔΔCt值来相对量化不同处理组或不同组织间目标基因的表达差异倍数。
标准曲线法定量分析:将已知浓度的标准品进行梯度稀释并同时进行qPCR反应,构建Ct值与对数模板浓度的标准曲线,用于计算未知样本中目标基因的绝对拷贝数。
检测范围
动物组织样本:适用于从哺乳动物、鸟类、鱼类等各类实验动物模型中采集的组织样本,如肝脏、脑组织、肌肉等,用于研究生理病理状态下的基因表达谱变化。
植物组织样本:涵盖农作物、林木、花卉等植物的根、茎、叶、花、果实等器官,用于分析植物生长发育、抗逆反应及代谢途径相关基因的表达调控。
细胞培养物:针对贴壁或悬浮培养的哺乳动物细胞系、昆虫细胞系、微生物等,用于检测药物处理、基因敲除/过表达等体外实验干预后的基因表达响应。
血液与体液样本: 包括人或其他动物的全血、血清、血浆、脑脊液等液体样本,常用于寻找疾病相关的循环生物标志物或无创诊断指标。
检测服务流程
沟通检测需求:为精准把握客户需求,我们会仔细审核申请内容,与客户深入交流,精准识别样品类型、明确测试要求,全面收集相关信息,确保无遗漏。
签订协议:根据沟通确定的检测需求及商定的服务细节,为客户定制包含委托书及保密协议的个性化协议。后续检测严格依协议执行。
样品前处理:收到样品后,开展样品预处理、制样及标准溶液制备等前处理工作。凭借先进仪器设备和专业技术人员,科学严谨对待每个细节,保证前处理规范准确。
试验测试:此为检测核心环节。运用规范实验测试方法精确检测每个样品,实验设计与操作均遵循科学标准,保障测试结果准确且可重复。
出具报告:测试结束立即生成详尽检测报告,经严格审核确保结果可靠准确,审核通过后交付客户。
我们秉持严谨踏实的态度,提供高品质、专业化检测服务。服务全程可追溯,严格遵守保密协议,保障客户满意度与信任度。






