抗病基因表达量分析试验

  发布时间:2025-06-27 10:16:35

检测项目

RNA完整性检测:RIN值≥7.0(Agilent 2100生物分析仪),28S/18S比值1.8-2.0

cDNA合成效率验证:OD260/280=1.8-2.0,逆转录酶活性≥20U/μL

内参基因稳定性分析:geNorm算法计算M值<0.5,CV值<5%

绝对定量标准曲线构建:R²≥0.99,扩增效率90%-110%

相对表达量计算:采用2-ΔΔCt法,重复样本CT值标准差<0.5

熔解曲线特异性分析:单峰检测(峰宽≤2℃),Tm值偏差±1℃

引物二聚体检测:ΔRn值<0.2,退火温度梯度优化

检测灵敏度验证:最低检出限10拷贝/μL,R²≥0.98

扩增动力学监测:荧光阈值设定在指数增长期,CT值≤35

表达量重复性验证:组内CV<15%,组间CV<20%

阳性对照设置:含目标片段质粒标准品,浓度梯度10^1-10^9拷贝/μL

阴性对照设置:无模板对照(NTC)和无逆转录酶对照(NRT)

检测范围

粮食作物抗病材料:水稻白叶枯病抗性基因Xa23表达动态监测

经济作物转基因品系:棉花黄萎病抗性基因GbVe1表达谱分析

园艺植物病原互作:番茄晚疫病抗性基因Ph-3接种后时序表达

林木抗逆育种:杨树溃疡病抗性基因PagWRKY75组织特异性表达

药用植物抗病种质:人参锈病抗性基因PgPR10根部表达量化

模式植物突变体:拟南芥抗细菌性斑点病基因RPS2敲除株系验证

真菌病原宿主:小麦赤霉病菌毒素合成基因TRI5表达抑制分析

病毒侵染机制:烟草花叶病毒复制酶基因126KDa侵染后表达动态

细菌抗性育种:柑橘溃疡病抗性基因CsLOB1启动子活性检测

线虫抗性资源:大豆孢囊线虫抗性基因Rhg1单倍型表达差异

病毒载体工程:基于TMV载体的干扰素基因植物瞬时表达检测

抗病相关代谢物:水杨酸合成通路基因ICS1/PAL表达关联分析

检测标准

ISO 20395:2019 生物技术-核酸定量方法效能要求

GB/T 34796-2017 核酸定量测定方法通则

MIQE指南:实时荧光定量PCR实验最小信息标准

GB/T 38164-2019 植物转基因成分实时荧光PCR检测方法

ISO 17822-2:2020 体外诊断检测系统-核酸扩增方法第2部分:实时荧光检测

YY/T 1596-2017 人类基因表达谱芯片技术规范

SN/T 5334.4-2020 基因检验实验室技术要求第4部分:实时荧光PCR方法

AOAC官方方法2020.05 植物病原基因表达检测方法

GB/T 33526-2017 RNA测序技术规范

EP17-A2标准:临床实验室检测限建立与验证指南

检测仪器

实时荧光定量PCR仪:配置多通道光学检测模块,支持SYBR Green/FAM/HEX/VIC四色检测,温度均一性±0.3℃

超微量核酸定量仪:检测范围2-2300ng/μL dsDNA,A260/A280比值分辨率0.01

全自动核酸提取系统:磁珠法通量96样本/批,RNA得率≥85%,基因组DNA残留<0.1%

梯度PCR仪:温度梯度范围30-100℃,升降温速率6℃/秒,孔间温差±0.5℃

电泳成像系统:紫外透射波长302nm,检测灵敏度0.1ng DNA,像素分辨率6.5百万

超低温离心机:最大离心力30,000×g,温控范围-20℃至40℃,支持角转子和水平转子

生物安全柜:CLASS II A2型,气流流速0.38m/s±20%,HEPA过滤效率99.999%

纳米分光光度计:检测体积0.3μL,波长范围220-800nm,检测限0.3pg/μL dsDNA

微量移液器校验仪:量程0.1-1000μL,校验精度±0.5%,符合ISO8655标准

恒温金属浴:控温范围4-99℃,模块温度均匀性±0.3℃,支持0.2mL/0.5mL PCR管

检测服务流程

沟通检测需求:为精准把握客户需求,我们会仔细审核申请内容,与客户深入交流,精准识别样品类型、明确测试要求,全面收集相关信息,确保无遗漏。

签订协议:根据沟通确定的检测需求及商定的服务细节,为客户定制包含委托书及保密协议的个性化协议。后续检测严格依协议执行。

样品前处理:收到样品后,开展样品预处理、制样及标准溶液制备等前处理工作。凭借先进仪器设备和专业技术人员,科学严谨对待每个细节,保证前处理规范准确。

试验测试:此为检测核心环节。运用规范实验测试方法精确检测每个样品,实验设计与操作均遵循科学标准,保障测试结果准确且可重复。

出具报告:测试结束立即生成详尽检测报告,经严格审核确保结果可靠准确,审核通过后交付客户。

我们秉持严谨踏实的态度,提供高品质、专业化检测服务。服务全程可追溯,严格遵守保密协议,保障客户满意度与信任度。

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