轮枝菌实时荧光PCR鉴定检测

检测项目

Verticilliumdahliae微菌核形成基因检测、V.albo-atrumITS区域扩增、V.longisporumβ-tubulin基因分型、V.nigrescens线粒体基因组测序、V.tricorpus钙调蛋白基因鉴定、V.isaacii核糖体RNA间隔区分析、V.nubilum致病因子VdNRS1检测、V.zaregamsianum细胞壁降解酶基因筛查、V.alfalfae转座子标记追踪、V.nonalfalfae组蛋白修饰位点识别、V.klebahnii分泌蛋白组分析、V.dahliae落叶型菌株特异序列鉴别、V.dahliae抗药性相关CYP51基因突变监测、V.albo-atrum无毒基因Avr2表达量测定、V.longisporum双亲本遗传标记溯源、轮枝菌属通用18SrRNA保守区扩增、植物内源参照基因COXⅡ同步验证、土壤微生物群落轮枝菌丰度定量、种子表面孢子载量评估、木质部侵染程度分级检测、病原菌活力状态ATP酶活性测定、杀菌剂处理后残留DNA定量、转基因作物抗性基因互作分析、共生微生物抑制效应评价、温度胁迫下毒力基因表达谱研究、不同pH环境适应性基因筛选、跨宿主传播潜力风险评估、复合侵染中优势菌株判别、历史标本DNA降解程度判定

检测范围

棉花根茎组织、番茄叶片维管束样本、马铃薯块茎浸出液、茄子韧皮部切片、向日葵茎髓分离物、草莓匍匐茎匀浆液、莴苣根系冲洗液、甜瓜嫁接接口瘢痕组织、橄榄树木质部渗出液、苜蓿根系分泌物浓缩物、玫瑰切花保鲜液残留物、苗圃栽培基质混合物组培苗继代培养基沉淀物种子包衣剂悬浮液有机肥腐熟堆料灌溉水沉淀膜过滤物农业机械接触面拭子昆虫介体肠道内容物实验室保存菌株斜面土壤剖面分层提取液植物病理标本馆腊叶标本水培营养液循环系统过滤膜温室空气沉降孢子收集片果蔬采后处理消毒液回收样

检测方法

采用TaqMan-MGB探针法进行靶标序列定量分析：1)通过CTAB-硅膜柱联合法提取样本总DNA，使用NanoDrop测定A260/A280纯度；2)针对EF1-α基因设计锁核酸修饰探针（5'-FAM-TCGTCCATGAC-MGB-3'），退火温度优化至62.3℃；3)建立25μL反应体系含PremixExTaq™HS12.5μL，引物终浓度400nM；4)运行两步法扩增程序：95℃预变性30s后进入45个循环（95℃5s,60℃34s）；5)设置ROX参比染料校正孔间荧光波动；6)采用ΔΔCt法计算目标基因相对表达量；7)熔解曲线阶段以0.3℃/s速率从60℃升至95℃验证产物特异性；8)每批次包含NTC阴性对照与质粒标准品（110⁶~110copies/μL）构建标准曲线

检测标准

ISO21427-1:2020分子生物学检测-植物病原真菌定性指南GB/T36851-2018农作物病害分子诊断通用要求SN/T5334.3-2020进出境植物检疫实时荧光PCR方法EPPOPM7/129(2)轮枝菌属官方鉴定程序APHISPPQCPHST真菌分子检测技术规范JISK0465:2021DNA扩增用试剂盒性能验证方法AOACOfficialMethod2021.09植物病原体核酸检测DINENISO16140-6:2019分子方法验证规程NY/T4017-2021农作物真菌病害分子监测技术规程BSENISO22174:2021食品链微生物学-PCR扩增通用要求

检测仪器

ABIQuantStudio™7Pro实时荧光定量系统：配备5色光学通道，支持Fast模式完成45循环仅需40分钟；EppendorfCentrifuge5430R：配备冷冻转子实现4℃条件下16000g离心保障核酸完整性；BeckmanCoulterBiomeki7自动化工作站：整合磁珠法完成96样本/批次的标准化提取流程；Bio-RadCFX96Touch深孔模块：兼容0.1mL单管与96孔板两种反应载体；ThermoScientificNanoDropOneC微量分光光度计：1μL样本实现全光谱（190-850nm）纯度扫描；SartoriusCubisII半微量天平：0.001mg精度满足标准品梯度稀释需求；MemmertINCOmed培养箱：维持180.5℃低温环境防止预混试剂降解；LabconcoPurifierLogic+生物安全柜：达到CLASSIIA2级别防护标准；AgilentTapeStation4150：通过DNAScreenTape分析试剂盒评估基因组DNA完整性；OlympusBX53荧光显微成像系统：配置DP80双摄像头同步采集明场与荧光信号

检测服务流程

沟通检测需求：为精准把握客户需求，我们会仔细审核申请内容，与客户深入交流，精准识别样品类型、明确测试要求，全面收集相关信息，确保无遗漏。

签订协议：根据沟通确定的检测需求及商定的服务细节，为客户定制包含委托书及保密协议的个性化协议。后续检测严格依协议执行。

样品前处理：收到样品后，开展样品预处理、制样及标准溶液制备等前处理工作。凭借先进仪器设备和专业技术人员，科学严谨对待每个细节，保证前处理规范准确。

试验测试：此为检测核心环节。运用规范实验测试方法精确检测每个样品，实验设计与操作均遵循科学标准，保障测试结果准确且可重复。

出具报告：测试结束立即生成详尽检测报告，经严格审核确保结果可靠准确，审核通过后交付客户。

我们秉持严谨踏实的态度，提供高品质、专业化检测服务。服务全程可追溯，严格遵守保密协议，保障客户满意度与信任度。