流式细胞术增殖检测

发布时间:2026-07-16 10:10:03

检测项目

DNA含量分析:通过碘化丙啶(PI)等染料标记DNA,分析细胞周期各时相(G0/G1, S, G2/M)的细胞比例,评估群体增殖状态。

BrdU/DNA双参数分析:结合溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入与DNA染色,特异性识别处于S期的细胞,精确量化DNA合成活性。

EdU检测:利用点击化学法检测5-乙炔基-2‘-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)的掺入,无需DNA变性,操作更简便快捷,用于S期细胞鉴定。

增殖核抗原Ki-67检测:通过抗体标记Ki-67蛋白,该蛋白存在于除G0期外的所有细胞周期阶段,是经典的增殖标志物。

磷酸化组蛋白H3(pHH3)检测:特异性识别有丝分裂期(M期)细胞,因为组蛋白H3的磷酸化与染色体凝集密切相关。

CFSE荧光稀释法:使用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)等染料预标记细胞,随着细胞分裂,荧光强度均分稀释,通过稀释倍数追踪分裂代数。

PKH26/PKH67膜染料稀释法:利用与细胞膜稳定结合的荧光染料进行标记,通过子代细胞荧光强度的逐代减半来追踪细胞分裂历史。

PCNA检测:检测增殖细胞核抗原(PCNA),其在S期表达量最高,可作为细胞进入增殖周期的指标之一。

细胞内信号通路磷酸化蛋白检测:如pRb、pERK、pAkt等,通过流式胞内染色技术分析增殖相关信号通路的活化状态。

凋亡与增殖联检:同时使用Annexin V/PI或Caspase活性检测与增殖标志物(如Ki-67),区分增殖活跃细胞与凋亡细胞。

检测范围

免疫细胞研究:评估T淋巴细胞、B淋巴细胞等在抗原刺激或药物处理后的克隆扩增与活化状态。

肿瘤学研究:分析肿瘤细胞的增殖指数、细胞周期分布,用于肿瘤分型、预后判断及化疗药物敏感性测试。

干细胞生物学:研究造血干细胞、间充质干细胞等干/祖细胞的自我更新与定向分化过程中的增殖行为。

药物研发与筛选:高通量评估候选化合物对特定细胞系增殖的抑制或促进作用,是药效学关键评价手段。

毒理学研究:检测环境毒素、化学物质对细胞周期进程的影响,评估其遗传毒性和细胞毒性。

植物细胞研究:适用于某些植物原生质体或悬浮细胞的周期分析与倍性鉴定。

微生物学应用:可用于细菌、酵母等微生物的周期分析及活力评估。

临床诊断辅助:在血液病等领域,通过检测骨髓或外周血细胞的异常增殖辅助白血病、淋巴瘤等疾病的诊断与分型。

组织工程与再生医学:监控工程化组织中细胞的生长、扩增情况,确保构建质量。

基础细胞生物学研究:广泛应用于任何涉及细胞生长、分裂、周期调控的机制研究中。

检测方法

直接荧光标记法:使用荧光染料直接与DNA(如PI)或通过点击化学反应与EdU结合,步骤相对简单。

间接免疫荧光法:针对BrdU、Ki-67等抗原,先加一抗,再用荧光素偶联的二抗进行检测,灵敏度高。

胞内染色技术:需对细胞进行固定和透膜处理,使抗体或染料能够进入细胞内与靶标(如磷酸化蛋白)结合。

活细胞染料标记追踪法:使用CFSE、PKH等染料在实验开始时标记活细胞,培养一定时间后上机分析其荧光稀释情况。

多色面板设计:结合不同荧光通道的抗体或染料,同时分析增殖标志物与细胞表面标志物、凋亡指标等,获取多维信息。

DNA染料与抗体共染色:典型如BrdU-FITC/PI双染,既能区分细胞周期时相,又能特异识别S期细胞。

核内抗原与表面抗原共检测:先进行表面抗原染色(活细胞),再固定透膜进行核内增殖抗原染色,用于特定亚群分析。

时间进程分析:在不同时间点取样检测,动态观察细胞增殖、周期分布的变化过程。

数据分析中的设门策略:正确设置FSC/SSC散点图、荧光信号直方图或双参数图的设门区域,排除碎片、粘连体干扰。

定量校准方法:使用已知DNA含量的鸡红细胞或标准微球进行仪器校准,确保DNA含量分析的准确性。

检测仪器设备

流式细胞仪主机:核心设备,负责细胞的流体聚焦、激光照射与光信号收集,是完成检测的硬件基础。

激光器:通常配备488nm蓝激光(用于FITC、PI、CFSE等)、633nm红激光(用于APC等)等多种激光,以激发不同荧光染料。

光学滤片系统:包括二向色镜和带通滤片,用于分离和选择特定波长的荧光信号至相应的探测器。

光电倍增管(PMT)探测器:将微弱的荧光信号转换为电信号并进行放大,其电压设置直接影响检测灵敏度与分辨率。

前向角散射光(FSC)探测器:检测细胞大小信息,常用于区分细胞与碎片及初步圈定目标细胞群。

侧向角散射光(SSC)探测器:检测细胞颗粒度和内部复杂度,有助于区分不同种类的细胞。

样本进样系统: 包括上样台、流动室和鞘液系统,确保单细胞悬液被鞘液包裹形成单列细胞流通过检测区。

数据处理计算机与专业软件: 如FlowJo、FCS Express等,用于采集、存储和分析流式数据文件(.fcs格式),进行图形绘制和统计计算。

涡旋振荡器: 用于充分混匀样本和试剂,确保染色的均匀性及上样的稳定性。

高速低温离心机: 用于细胞洗涤、沉淀等样品制备步骤,低温环境有助于保持细胞活性和抗原稳定性。

检测服务流程

沟通检测需求:为精准把握客户需求,我们会仔细审核申请内容,与客户深入交流,精准识别样品类型、明确测试要求,全面收集相关信息,确保无遗漏。

签订协议:根据沟通确定的检测需求及商定的服务细节,为客户定制包含委托书及保密协议的个性化协议。后续检测严格依协议执行。

样品前处理:收到样品后,开展样品预处理、制样及标准溶液制备等前处理工作。凭借先进仪器设备和专业技术人员,科学严谨对待每个细节,保证前处理规范准确。

试验测试:此为检测核心环节。运用规范实验测试方法精确检测每个样品,实验设计与操作均遵循科学标准,保障测试结果准确且可重复。

出具报告:测试结束立即生成详尽检测报告,经严格审核确保结果可靠准确,审核通过后交付客户。

我们秉持严谨踏实的态度,提供高品质、专业化检测服务。服务全程可追溯,严格遵守保密协议,保障客户满意度与信任度。

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