核酸提取纯度分析

发布时间:2026-07-03 10:12:00

检测项目

核酸浓度:通过测定A260处的吸光度值,定量样本中核酸的总含量,是纯度评估的基础。

A260/A280比值:最常用的蛋白质污染指标,纯DNA的理想值约为1.8,纯RNA约为2.0。

A260/A230比值:评估盐类、碳水化合物或有机溶剂(如酚、胍盐)等污染物残留的关键指标,理想值应大于2.0。

琼脂糖凝胶电泳分析:直观判断核酸完整性(如基因组DNA是否降解、RNA的28S/18S条带比例)及是否存在异常条带。

荧光染料结合定量:使用特异性荧光染料(如PicoGreen, RiboGreen)进行高灵敏度定量,尤其适用于低浓度或含污染物样本。

蛋白质残留检测:采用比色法(如Bradford法、BCA法)或荧光法专门检测共提取的蛋白质杂质。

核糖核酸酶(RNase)污染检测:针对RNA样本,评估是否存在导致RNA降解的RNase活性残留。

脱氧核糖核酸酶(DNase)污染检测:针对DNA样本,评估是否存在导致DNA降解的DNase活性残留。

内毒素/热原检测:对于用于细胞转染或体内实验的核酸,需检测革兰氏阴性菌细胞壁成分(内毒素)的残留水平。

pH值与离子强度:检测洗脱缓冲液的pH和盐离子浓度,确保其适合下游酶学反应(如PCR、酶切)。

检测范围

基因组DNA:从血液、组织、细胞、微生物等各类生物样本中提取的高分子量DNA。

质粒DNA:从细菌培养物中提取的环状DNA,需评估超螺旋、开环及线性构型的比例。

PCR产物与酶切片段:经扩增或酶切反应后纯化的特定大小DNA片段。

总RNA:包含mRNA、rRNA、tRNA等多种RNA组分的完整提取物。

信使RNA (mRNA):从总RNA中进一步纯化得到的带有poly(A)尾巴的RNA,对纯度要求极高。

小分子RNA (miRNA, siRNA):长度较短的RNA分子,需要高灵敏度方法进行定量和纯度分析。

病毒核酸:从病毒颗粒或临床样本中提取的病毒DNA或RNA,通常浓度较低且背景复杂。

福尔马林固定石蜡包埋 (FFPE) 样本核酸:因固定处理而存在不同程度降解和交联的核酸,纯度分析更具挑战性。

环境样本核酸:从土壤、水体等环境样本中提取的微生物宏基因组DNA/RNA,杂质种类多。

法医与古生物样本核酸:微量、高度降解且污染严重的痕量DNA,对纯度分析的灵敏度要求苛刻。

检测方法

紫外-可见分光光度法:基于核酸在260 nm处有最大吸收峰的原理,快速测定浓度和A260/A280、A260/A230比值。

荧光光度法:利用荧光染料与核酸特异性结合后荧光增强的特性,实现高灵敏度、高特异性的定量。

琼脂糖凝胶电泳法:在电场作用下,根据核酸片段大小和构型在凝胶中的迁移率不同进行分离和可视化分析。

毛细管电泳法:自动化程度高,可精确分析核酸片段大小分布、浓度及纯度,分辨率优于琼脂糖凝胶电泳。

微流控芯片电泳法:在芯片通道内进行电泳分离,所需样本量极少,可快速提供类似毛细管电泳的数据。

实时荧光定量PCR (qPCR) 法:通过扩增效率来间接评估核酸样本中抑制剂的残留情况,是功能性的纯度验证方法。

数字PCR (dPCR) 法:绝对定量方法,可精确定量目标核酸拷贝数,并评估抑制剂对扩增的影响。

高效液相色谱法 (HPLC): 可分离并定量不同组分(如不同构型质粒、杂质核苷酸等),提供高分辨率的纯度信息。

<强>生物分析仪/片段分析仪法: 集成微流控、电泳和荧光检测的自动化平台,提供样品完整性数值(如RIN值、DIN值)。

<强>下一代测序 (NGS) 预检评估: 通过对少量文库进行浅层测序,评估核酸样本的复杂度、污染及接头连接效率等。

检测仪器设备

<强>紫外-可见分光光度计: 传统的主力设备,用于测量紫外吸收值以计算浓度和纯度比值,需使用石英比色皿或微量检测模块。

<强>微量紫外分光光度计 (NanoDrop): 只需微量样本(0.5-2 μL),无需稀释即可快速测量全波长光谱,操作简便快捷。

<强>荧光分光光度计: 配备特定激发/发射滤光片,用于执行基于荧光染料的灵敏定量检测。

<强>多功能酶标仪: 可兼容紫外吸收、荧光强度、时间分辨荧光等多种检测模式的高通量平台,适合批量样本分析。

<强>琼脂糖凝胶电泳系统: 包括电泳槽、电源和成像系统(通常为紫外或蓝光透射仪配合CCD相机),用于常规完整性检查。

<强>毛细管电泳仪 (如 Agilent Bioanalyzer, Fragment Analyzer): 基于芯片或毛细管的自动化电泳设备,提供高分辨率的电泳图谱和数字化数据。

<强>实时荧光定量PCR仪: 用于执行基于qPCR的抑制剂检测实验,评估核酸样本对下游扩增反应的影响。

<强>数字PCR仪: 通过将反应体系分割成数万个微滴或微孔进行绝对定量,能耐受一定程度的抑制剂干扰。

<强>高效液相色谱仪 (HPLC): 配备离子交换或体积排阻色谱柱以及紫外/荧光检测器,用于高精度分离分析核酸组分。

<强>生物分析仪 (如 Agilent 2100 Bioanalyzer, TapeStation): 专用的集成化微流控分析平台,通过软件自动给出样品的完整性评分和浓度值。

检测服务流程

沟通检测需求:为精准把握客户需求,我们会仔细审核申请内容,与客户深入交流,精准识别样品类型、明确测试要求,全面收集相关信息,确保无遗漏。

签订协议:根据沟通确定的检测需求及商定的服务细节,为客户定制包含委托书及保密协议的个性化协议。后续检测严格依协议执行。

样品前处理:收到样品后,开展样品预处理、制样及标准溶液制备等前处理工作。凭借先进仪器设备和专业技术人员,科学严谨对待每个细节,保证前处理规范准确。

试验测试:此为检测核心环节。运用规范实验测试方法精确检测每个样品,实验设计与操作均遵循科学标准,保障测试结果准确且可重复。

出具报告:测试结束立即生成详尽检测报告,经严格审核确保结果可靠准确,审核通过后交付客户。

我们秉持严谨踏实的态度,提供高品质、专业化检测服务。服务全程可追溯,严格遵守保密协议,保障客户满意度与信任度。

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