原位末端标记法检测

发布时间:2026-06-11 09:53:55

检测项目

凋亡细胞原位检测:在组织或细胞样本中原位识别发生程序性死亡的细胞,是该方法最核心的应用。

DNA单链断裂检测:特异性标记因凋亡早期或某些损伤因素产生的DNA单链缺口。

DNA双链断裂检测:主要针对凋亡晚期核酸内切酶切割产生的DNA双链断裂末端进行标记。

Caspase依赖性凋亡评估:通过检测特征性的DNA ladder片段末端,评估Caspase激活的经典凋亡通路。

组织病理学评分:对组织切片中阳性染色细胞的数目和分布进行半定量分析,用于病理诊断和分级。

药物诱导凋亡效应评价:用于评估化疗药物、靶向药物等对肿瘤细胞或特定组织诱导凋亡的效果。

神经退行性疾病研究:检测脑组织等神经系统中异常凋亡的神经元,辅助研究阿尔茨海默病、帕金森病等。

心肌细胞凋亡分析:应用于心肌梗死、心力衰竭等心血管疾病模型中缺血缺氧导致的心肌细胞死亡研究。

胚胎发育研究:观察胚胎发育过程中特定部位或时期的生理性细胞凋亡(如指蹼消失)。

毒理学安全性评价:检测外源性化学物质或环境毒素对特定器官(如肝、肾)的细胞损伤与凋亡诱导作用。

检测范围

石蜡包埋组织切片:适用于临床病理存档样本和动物实验组织,是应用最广泛的样本类型。

冰冻组织切片:用于需要更好保存抗原活性或避免石蜡包埋高温过程的样本。

细胞涂片:适用于血液、骨髓、胸腹水或培养的贴壁/悬浮细胞制成的涂片。

细胞爬片:常用于体外培养的贴壁细胞,可在原位进行固定和标记,保持细胞形态与位置。

组织芯片:可在同一张玻片上高通量分析数十至上百个不同组织样本的凋亡情况。

植物组织切片:应用于植物发育生物学及抗逆性研究中细胞程序性死亡的检测。

实验动物各器官组织:包括肝、肾、脾、肺、脑、肠道等,用于药效学与毒理学研究。

人类肿瘤组织:如乳腺癌、肺癌、胃癌、淋巴瘤等,用于预后评估和治疗反应监测。

心血管系统组织:包括动脉粥样硬化斑块、缺血再灌注损伤的心肌与血管组织。

神经系统组织:涵盖大脑皮层、海马、脊髓等多种神经组织,用于神经疾病模型研究。

检测方法

TUNEL法:最经典的方法,利用末端脱氧核苷酸转移酶将标记的dUTP连接到DNA断裂的3‘-OH末端。

原位缺口平移法:利用DNA聚合酶I将标记核苷酸掺入到DNA单链缺口中,主要用于检测早期断裂。

酶标法显色检测:常用辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记,与底物反应产生不溶性有色沉淀,普通光学显微镜即可观察。

荧光标记检测:使用FITC、Cy3等荧光素标记,通过荧光显微镜观察,灵敏度高且可进行多色标记。

样品预处理与固定:采用多聚甲醛或中性福尔马林固定样本,以保持形态并允许探针和酶进入。

蛋白酶K消化:关键步骤,用于暴露被蛋白包裹的DNA断裂末端,但需优化时间以避免过消化。

内源性过氧化物酶阻断:使用过氧化氢甲醇溶液处理,消除石蜡切片中内源性酶活性造成的假阳性。

标记反应体系孵育:在湿盒中于37°C下孵育切片,使标记酶与底物在断裂末端发生特异性结合反应。

苏木素复染:显色后用苏木素对细胞核进行复染,提供组织形态学背景以便定位阳性信号。

结果判读与对照设置:必须设立阳性对照(用DNase I处理)和阴性对照(不加末端转移酶),以确保结果特异性。

检测仪器设备

光学显微镜:用于观察酶标显色法结果的基本设备,需配备高倍物镜进行细胞核细节观察。

荧光显微镜:观察荧光标记结果的必备仪器,需配备适合荧光素激发/发射波长的滤光片组。

共聚焦激光扫描显微镜

检测服务流程

沟通检测需求:为精准把握客户需求,我们会仔细审核申请内容,与客户深入交流,精准识别样品类型、明确测试要求,全面收集相关信息,确保无遗漏。

签订协议:根据沟通确定的检测需求及商定的服务细节,为客户定制包含委托书及保密协议的个性化协议。后续检测严格依协议执行。

样品前处理:收到样品后,开展样品预处理、制样及标准溶液制备等前处理工作。凭借先进仪器设备和专业技术人员,科学严谨对待每个细节,保证前处理规范准确。

试验测试:此为检测核心环节。运用规范实验测试方法精确检测每个样品,实验设计与操作均遵循科学标准,保障测试结果准确且可重复。

出具报告:测试结束立即生成详尽检测报告,经严格审核确保结果可靠准确,审核通过后交付客户。

我们秉持严谨踏实的态度,提供高品质、专业化检测服务。服务全程可追溯,严格遵守保密协议,保障客户满意度与信任度。

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