
蛋白质复合物鉴定:通过亲和纯化结合质谱分析,直接鉴定与目标蛋白(诱饵蛋白)存在物理相互作用的蛋白质成员。
相互作用强度评估:基于质谱信号强度或定量信息,半定量或定量地评估相互作用的相对强弱或亲和力。
翻译后修饰依赖性互作研究:探究特定翻译后修饰(如磷酸化、泛素化)是否影响或介导了蛋白质间的相互作用。
互作界面与结构域映射:通过交联质谱或有限蛋白酶解等方法,鉴定相互作用发生的具体蛋白区域或残基。
动态相互作用监测:利用定量质谱技术,在不同时间点、不同刺激或细胞周期下,监测蛋白质相互作用的动态变化。
竞争性相互作用分析:研究不同蛋白质或小分子对同一结合位点的竞争,揭示互作网络中的调控关系。
内源性复合物分析:在不引入外源标签的情况下,利用特异性抗体直接富集内源性蛋白复合物进行鉴定。
互作特异性验证:通过设置严格的阴性对照(如突变体、无关标签),排除非特异性结合蛋白,确保互作的真实性。
全网络互作图谱构建:针对特定通路或细胞器,系统性地鉴定所有核心蛋白的相互作用伙伴,绘制全局互作网络。
相互作用亲和常数测定:结合定量质谱与滴定实验,计算蛋白质相互作用的解离常数,提供定量的热力学参数。
可溶性蛋白复合物:存在于细胞质、核质等部位的稳定或瞬时的可溶性多蛋白组装体。
膜蛋白相互作用网络:针对跨膜蛋白或膜锚定蛋白,使用去垢剂溶解后研究其相互作用伴侣。
核酸-蛋白质互作复合物:研究转录因子、RNA结合蛋白等与DNA或RNA形成的核糖核蛋白复合物。
大型分子机器:如核孔复合体、剪接体、蛋白酶体、核糖体等超分子结构的组成与装配分析。
信号转导通路复合物:解析生长因子、免疫受体等信号通路中上下游蛋白的动态组装与解离。
染色质相关复合物:包括组蛋白修饰酶复合物、染色质重塑复合物及转录共调节因子复合物。
细胞器互作界面蛋白:鉴定位于内质网-线粒体接触点等细胞器膜接触位点的蛋白质相互作用。
病原体-宿主蛋白互作:研究病毒、细菌等病原体蛋白与宿主细胞蛋白的相互作用,揭示感染机制。
药物靶点蛋白复合物:确定小分子药物或候选化合物在细胞内的直接作用蛋白及影响的复合物。
相分离凝聚体组分:分析与液-液相分离形成的无膜细胞器(如应激颗粒、核仁)相关的蛋白互作网络。
亲和纯化-质谱联用:最主流的方法,将目标蛋白进行亲和标签标记或抗体免疫沉淀,纯化后利用质谱鉴定共纯化蛋白。
邻近标记-质谱联用:使用工程酶在活细胞内对邻近蛋白进行生物素标记,随后富集并质谱鉴定,用于研究弱相互作用或细胞器互作。
交联质谱:使用化学交联剂将空间上邻近的蛋白质或氨基酸残基共价连接,通过质谱鉴定交联肽段,提供互作界面和结构信息。
串联亲和纯化:采用两步纯化策略,显著降低非特异性结合背景,提高互作鉴定的信噪比。
定量蛋白质组学策略:应用SILAC、TMT/iTRAQ或Label-free等定量技术,比较不同样品间互作蛋白的丰度变化,区分特异性与非特异性结合。
热蛋白质组分析:通过加热导致蛋白变性,利用质谱监测蛋白质的热稳定性变化,间接反映配体结合或蛋白互作状态。
有限蛋白酶解质谱法:比较结合与未结合状态下蛋白质的酶解图谱差异,揭示因相互作用而受到保护的区域。
Native MS分析:在非变性条件下使用质谱直接分析完整的蛋白质复合物,测定其化学计量比和高级结构。
免疫共沉淀验证:作为质谱结果的验证手段,使用特异性抗体通过Western Blot验证候选相互作用。
生物信息学与数据库分析:利用STRING、BioGRID等数据库进行网络分析,并结合GO、KEGG等工具进行功能富集分析,阐释生物学意义。
高分辨串联质谱仪:核心设备,如Q-Exactive系列、Orbitrap Fusion系列,提供高精度、高质量分辨率的肽段和碎片离子检测。
纳升液相色谱系统:用于肽段的高效分离,降低样品进样量,提高检测灵敏度,是质谱前端的关键组成部分。
超声波细胞破碎仪:用于高效、均一地裂解细胞,释放细胞内蛋白质及复合物,同时避免过度产热导致复合物解离。
低温高速离心机:用于细胞器分离、样品澄清及实验过程中的沉淀步骤,保持蛋白复合物的天然状态。
亲和层析系统:包括重力流柱、FPLC或自动化液体处理工作站,用于抗体或标签介导的蛋白复合物纯化。
蛋白质电泳与转印系统:用于样品质量控制、预实验验证及Western Blot验证。
化学交联反应平台:提供可控的交联反应环境,确保交联效率与特异性,是XL-MS实验的关键。
生物信息学服务器与工作站:配备高性能计算资源,用于处理海量的质谱原始数据,运行数据库搜索和复杂网络分析。
细胞培养与处理设备:包括CO2培养箱、生物安全柜等,用于制备用于互作研究的各种细胞样品。
样品制备自动化工作站:实现从酶解到除盐等样品前处理步骤的自动化,提高实验通量和重复性。
沟通检测需求:为精准把握客户需求,我们会仔细审核申请内容,与客户深入交流,精准识别样品类型、明确测试要求,全面收集相关信息,确保无遗漏。
签订协议:根据沟通确定的检测需求及商定的服务细节,为客户定制包含委托书及保密协议的个性化协议。后续检测严格依协议执行。
样品前处理:收到样品后,开展样品预处理、制样及标准溶液制备等前处理工作。凭借先进仪器设备和专业技术人员,科学严谨对待每个细节,保证前处理规范准确。
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