琼脂糖凝胶电泳成像检测

发布时间:2026-05-22 11:53:52

检测项目

DNA片段大小分析:通过比较样品DNA条带与DNA分子量标准的位置,确定未知DNA片段的精确大小。

RNA完整性评估:通过观察总RNA在凝胶上的三条特征性条带(28S、18S、5S),判断RNA是否发生降解。

PCR产物验证:确认聚合酶链式反应(PCR)是否成功扩增出预期大小的目标片段,是分子克隆的关键步骤。

DNA浓度与纯度估算:通过条带的荧光亮度与标准品对比,粗略估算DNA浓度;通过条带单一性判断纯度。

限制性内切酶酶切验证:检测DNA经限制性内切酶消化后是否产生预期数目和大小的片段,验证质粒构建或基因型。

核酸样品质量检查:在后续精细实验(如测序、转染)前,快速检查提取的核酸样品是否有降解或污染。

Southern Blot前处理:在将DNA转移至膜上进行杂交(Southern Blot)前,通过电泳确认DNA已按大小分离且质量合格。

Northern Blot前处理:在RNA转移至膜上进行杂交(Northern Blot)前,评估RNA分离效果和完整性。

DNA损伤检测(彗星实验):通过特殊的琼脂糖凝胶电泳,使受损细胞的DNA形成彗星状拖尾,用于基因毒性分析。

蛋白质免疫印迹(Western Blot)辅助:有时用于初步检查蛋白质样品的完整性或浓度,但主要分离介质为聚丙烯酰胺凝胶。

检测范围

基因组DNA:用于检测从各种生物样本(血液、组织、细胞)中提取的大分子量基因组DNA的完整性和大小。

质粒DNA:用于分析不同构型的质粒DNA(超螺旋、线性、开环),并验证其大小和纯度。

PCR扩增产物:适用于验证从数十碱基对到数千碱基对范围内的PCR扩增片段。

限制性酶切片段:用于分离和鉴定经限制性内切酶消化产生的、大小在数百至数万碱基对之间的DNA片段。

总RNA与mRNA:主要用于评估总RNA的完整性,也可用于观察mRNA富集效果。

siRNA与miRNA:使用高浓度琼脂糖凝胶或特殊的电泳条件,可以检测小分子RNA(如siRNA、miRNA)的存在和大小。

DNA标记物(Ladder):作为分子量标准,其本身也是被成像检测的对象,用于构建片段大小与迁移距离的标准曲线。

酶联产物:检测如连接反应、末端标记等酶学反应产生的核酸产物。

核酸蛋白复合物:在电泳迁移率变动分析(EMSA)中,用于检测蛋白质与特定核酸序列的结合情况。

环境微生物样本DNA:用于分析从环境样本(土壤、水)中提取的微生物群落DNA的总体质量。

检测方法

琼脂糖凝胶制备:根据待测核酸片段大小,选择合适浓度的琼脂糖粉末,溶于缓冲液(如TAE或TBE)中加热溶解,倒入制胶槽并插入梳子。

样品制备与上样:将核酸样品与上样缓冲液(含指示剂和密度剂)混合,用微量移液器加入凝胶加样孔中。

电泳分离:将凝胶置于电泳槽中,加入足量电泳缓冲液,在恒定电压下进行电泳,使核酸分子根据大小向阳极迁移分离。

核酸染色:电泳结束后,将凝胶浸入含有荧光染料(如溴化乙锭、GelRed、SYBR系列)的溶液中染色,使核酸与染料结合。

凝胶成像:将染色后的凝胶置于凝胶成像系统的样品台上,准备进行图像采集。

紫外透射光成像:对于溴化乙锭等染料,使用紫外透射光源激发荧光,并通过摄像头捕获发射的荧光图像,是最经典的方法。

蓝光透射光成像:对于SYBR Safe等染料,使用安全的蓝光光源进行激发,减少对核酸的损伤和紫外线的危害。

白光反射光成像:对于某些无需染色的核酸标记物(如预染Marker)或特殊染色方法,可使用白光光源进行反射光成像。

图像采集与参数调整:在成像软件中设置合适的曝光时间、光圈、焦距和滤镜,以获得信噪比高、条带清晰的图像。

图像分析与存档:使用软件对图像进行条带识别、分子量计算、浓度估算等分析,并将结果图像和数据妥善保存。

检测仪器设备

电泳仪电源:提供稳定直流电的装置,可设定恒压、恒流或恒功率模式,驱动核酸在凝胶中迁移。

水平电泳槽:盛放缓冲液和凝胶的容器,通常包括槽体、电极和制胶托盘,是进行核酸电泳分离的核心平台。

微波炉或加热板:用于加热溶解琼脂糖粉末,以制备均匀的凝胶溶液。

制胶模具与梳子:用于浇注和成型琼脂糖凝胶,梳子形成加样孔。

微量移液器及上样枪头:用于精确量取和点样核酸样品与分子量标准品。

凝胶成像系统:核心成像设备,集成了激发光源、样品台、滤镜和图像捕获装置。

紫外透射光源:提供特定波长(如302nm或365nm)的紫外光,用于激发传统荧光染料(如EB)。

蓝光透射光源:提供波长约470nm的蓝光,用于激发SYBR Safe等更安全的染料,保护样品和操作者。

高灵敏度CCD或CMOS摄像头:捕获凝胶在激发光下发出的微弱荧光信号,并将其转化为数字图像。

计算机与成像分析软件:控制成像系统运行,进行图像采集、处理、分析和数据管理。

检测服务流程

沟通检测需求:为精准把握客户需求,我们会仔细审核申请内容,与客户深入交流,精准识别样品类型、明确测试要求,全面收集相关信息,确保无遗漏。

签订协议:根据沟通确定的检测需求及商定的服务细节,为客户定制包含委托书及保密协议的个性化协议。后续检测严格依协议执行。

样品前处理:收到样品后,开展样品预处理、制样及标准溶液制备等前处理工作。凭借先进仪器设备和专业技术人员,科学严谨对待每个细节,保证前处理规范准确。

试验测试:此为检测核心环节。运用规范实验测试方法精确检测每个样品,实验设计与操作均遵循科学标准,保障测试结果准确且可重复。

出具报告:测试结束立即生成详尽检测报告,经严格审核确保结果可靠准确,审核通过后交付客户。

我们秉持严谨踏实的态度,提供高品质、专业化检测服务。服务全程可追溯,严格遵守保密协议,保障客户满意度与信任度。

本文链接:https://test.yjssishiliu.com/qitajiance/103367.html
获取最新报价
中析研究所为您提供科学严谨的测试试验方案
推荐检测

400-640-9567

北京中科光析科学技术研究所

投诉举报:010-82491398

企业邮箱:010@yjsyi.com

地址:北京市丰台区航丰路8号院1号楼1层121

山东分部:山东省济南市历城区唐冶绿地汇中心36号楼

北京中科光析科学技术研究所 京ICP备15067471号-11