限制性核酸内切酶的核心检测项目包括活性单位测定、底物特异性验证、纯度分级分析及稳定性测试四大模块。活性测定采用λDNA标准底物进行单位定义（1U=1μg DNA完全消化/1h/37℃），通过琼脂糖凝胶电泳定量未切割底物比例。特异性检测需构建包含典型识别位点（如EcoRI的GAATTC）及近源序列（如GAACTC）的合成DNA片段组，评估错配耐受阈值。纯度分析执行SDS-PAGE电泳与HPLC联用技术，要求蛋白质纯度≥95%，且无RNase/DNase污染信号。长期稳定性测试在-20℃与4℃双条件下进行24个月加速老化实验，活性衰减率需≤5%/年。
本检测体系适用于原核表达系统（如大肠杆菌BL21）生产的I/II型限制性内切酶及其突变体改造产品。涵盖常规温度反应型（37℃）、热稳定型（65℃）及冷适应型（25℃）等温度特性变异株的效能验证。针对甲基化修饰敏感型酶种（如DpnI），需额外设置含甲基化/非甲基化对照组的双盲测试体系。对于商业级重组酶产品，需验证其在不同缓冲体系（低/中/高盐）、辅助因子浓度（Mg²+ 1-10mM）及反应时长（5min-16h）下的性能稳定性。
标准检测流程依据ISO 21748:2017与CLSI EP12-A2规范建立三级验证体系：初筛阶段采用终点法测定半数抑制浓度（IC50），使用梯度稀释法在96孔板中建立剂量-效应曲线；精密度验证执行NCCLS EP5-A2方案进行批内/批间重复性测试；交叉验证采用双盲样本比对国际标准物质（NIST SRM 2372）。特异性分析引入焦磷酸测序技术定量切割位点上下游10bp范围内的碱基偏好性。对于超螺旋DNA底物切割效率评估，需联合使用原子力显微镜成像与琼脂糖氯喹凝胶电泳双重验证。
核心检测设备包括：微量紫外分光光度计（Nanodrop OneC, 波长范围190-850nm）用于酶浓度标定；实时荧光定量PCR仪（ABI QuantStudio 5）监测切割过程中的荧光标记探针释放量；毛细管电泳系统（Agilent 2100 Bioanalyzer）分析DNA片段分布；等温滴定量热仪（MicroCal ITC200）测定酶-底物结合常数；动态光散射仪（Malvern Zetasizer Nano ZS）监控储存过程中的蛋白质聚集现象。所有仪器均需通过NIST可溯源性校准并执行IQ/OQ/PQ三级认证
沟通检测需求：为精准把握客户需求，我们会仔细审核申请内容，与客户深入交流，精准识别样品类型、明确测试要求，全面收集相关信息，确保无遗漏。
签订协议：根据沟通确定的检测需求及商定的服务细节，为客户定制包含委托书及保密协议的个性化协议。后续检测严格依协议执行。
样品前处理：收到样品后，开展样品预处理、制样及标准溶液制备等前处理工作。凭借先进仪器设备和专业技术人员，科学严谨对待每个细节，保证前处理规范准确。
试验测试：此为检测核心环节。运用规范实验测试方法精确检测每个样品，实验设计与操作均遵循科学标准，保障测试结果准确且可重复。
出具报告：测试结束立即生成详尽检测报告，经严格审核确保结果可靠准确，审核通过后交付客户。
我们秉持严谨踏实的态度，提供高品质、专业化检测服务。服务全程可追溯，严格遵守保密协议，保障客户满意度与信任度。
